猪源双歧杆菌发酵工艺的研究 第5页
图4-1不同温度对猪源双歧杆菌发酵特性的影响
4.3 起始pH
培养基中的起始pH值直接影响菌的生长速度。在生产中，一般都把起始pH调整为最适值（双歧杆菌最适值为6..5~7.0）。然而在培养过程中，随着菌体分解代谢培养基中的糖产生有机酸，使pH下降，双歧杆菌生长受到抑制，生长减慢。当pH下降到一定值时菌数不再增加。
表4-2是不同起始pH值下发酵液的OD600。
表4-2不同初始pH值对猪源双歧杆菌发酵特性的影响
序号 pH OD600毕业论文
http://www.youerw.com1 6.2 1.633
2 6.4 1.790
3 6.6 1.906
4 6.8 2.074
5 7.0 2.188
6 7.2 2.453
7 7.4 2.406
绘制出生长曲线，图4-2。
图4-2 不同初始pH值对猪源双歧杆菌发酵特性的影响
4.4 培养基的选定本文来自优^文~论-文.网
与所有的微生物一样，双歧杆菌的基本营养需求也是优大营养素——碳源、氮源、能源、生长因子和水。因为双歧杆菌是化能异养微生物，故其碳源兼作能源。现对双歧杆菌较独特的碳源、氮源和生长因子的需求进行介绍。
4.4.1 碳源
双歧杆菌细胞的含碳量约占干重的50%，故碳源是活细胞除水分外需要量最大的营养物。
双歧杆菌的碳源谱比较窄。最常用的碳源是单糖中的己糖，部分菌种能利用戊糖，只有极少数菌种还可利用淀粉。双歧杆菌的主要碳源如下：
葡萄糖>蔗糖>麦芽糖>蜜二糖>果糖>棉籽糖>半乳糖>核糖>乳糖>阿拉伯糖>淀粉>木糖
4.4.2 氮源
双歧杆菌由于其对蛋白质分解能力和氨基酸结合能力很弱，因此在培养双歧杆菌时，普遍需向他们提供含各种氨基酸和肽类的有机氮源，包括蛋白胨、酵母膏、牛肉膏或番茄汁等。
4.4.3 生长因子
双歧杆菌是一类对生长因子，尤其是文生素依赖性很强的微生物。至今未发现像大肠希氏菌(Escherichia coli)那样能在只含有葡萄糖一种有机物的无机盐培养基上良好生长的双歧杆菌。本研究中采用牛肝浸出液作为生长因子。
牛肝浸出液含有丰富的文生素、碱基、卟啉及其衍生物、甾醇、胺类和各种脂肪酸、矿物质，满足双歧杆菌的生长需要。
采用正交实验方法确定双歧杆菌最佳培养基配方。
A、B、C、D四个因素，A是氮源，为酵母浸膏、胰蛋白胨和大豆蛋白胨；B为碳源，采用葡萄糖；C为双歧因子低聚果糖；D为生长因子牛肝浸液。表4-3为不同培养基下发酵液的OD600。
表4-3 猪源双歧杆菌培养基优化的正交实验结果 L9(34)
序号 因素 指标
A(%) B(%) C(%) D(%) OD600 pH值
1 0.9 ：0.3：0.6 1.5 0.2 5 1.792 3.79
2 0.9 ：0.3：0.6 2.0 0.3 10 2.007 3.77
3 0.9 ：0.3：0.6 2.5 0.4 15 1.743 3.70
4 0.9：0.6：0.6 1.5 0.3 15 1.940 3.74
5 0.9：0.6：0.6 2.0 0.4 5 1.924 3.72
6 0.9：0.6：0.6 2.5 0.2 10 1.902 3.76
7 0.9：0.6：0.3 1.5 0.4 10 1.916 3.70
8 0.9：0.6：0.3 2.0 0.2 15 1.864 3.71
9 0.9：0.6：0.3 2.5 0.3 5 2.091 3.71
4.5 测定双歧杆菌的生长曲线毕业论文
http://www.youerw.com基于以上三组已确定的条件，测定双气杆菌的生长状况和产酸情况。
测定方法：使用已确定的最佳培养方案培养双歧杆菌，每2小时从摇瓶中用灭菌针筒抽出1mL培养液，用精密pH计测定发酵液pH值。发酵液稀释10倍，使用分光光度计，在600nm处测定吸光度。做10个平行试验。
表4-4是根据以上方法测定的OD600值和pH值。
表4-4 双歧杆菌的生长情况及pH变化
序号 发酵时间(h) OD600 pH本文来自优^文~论-文.网
1 0 0.374 7.19
2 2 0.673 5.93
3 4 1.365 4.52
4 6 1.493 4.37
5 8 1.610 4.25
6 10 1.624 4.11
7 12 1.631 4.09
8 14 1.652 4.06
9 16 1.653 4.03
10 20 1.617 4.00
11 22 1.609 3.98
根据测定的OD600值和pH值描绘出双歧杆菌的生长曲线，如图4-3。
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