鸡源大肠杆菌耐药性监测
摘要：了解上海市鸡源大肠杆菌耐药情况及耐药规律。以灭菌棉签拭采鸡肛（泄殖腔）和拭子蘸取新鲜粪便，分别对上海地区3个鸡场进行采样，按照常规法分离培养细菌，应用API20E试纸条进行细菌鉴定，采用微量肉汤稀释法测定了大肠杆菌对13种抗菌药物耐药情况。对172株大肠杆菌进行药敏试验的结果显示，其中耐药率在90％以上的有恩诺沙星（96.5％）、四环素（94.8％）、氨苄西林（94.2％）、庆大霉素（93.6％）、复方新诺明（91.3％）；80％以上的有阿米卡星（85.5％）、阿莫西林（82.0％）、氟苯尼考（80.2％）；70％以上的磺胺异噁唑（75.0％）、氧氟沙星（73.8％）；50％以的有头孢唑啉（52.3％）；40％以的有头孢噻呋（41.9％），而对粘杆菌素几乎全部敏感（99.4％）。上述3个鸡场分离的大肠杆菌株耐药性严重，耐药谱复杂，多重耐药性、交叉耐药性严重。
论文关键词：鸡,大肠杆菌,耐药性
抗菌药物在畜禽养殖上的应用，无论对治疗和预防动物疫病、促进生长，还是提高畜牧业生产效能方面都起到了积极的作用。但是，随着抗菌药物的广泛应用，细菌耐药性变得越来越严重。动物源性耐药菌株的存在，直接使抗菌药物疗效降低，病程延长，导致患病动物死亡率升高，带来经济损失；也可以直接或间接地进入食物链传播给人，造成难以控制的感染，更可能通过动物与动物之间、人与动物之间耐药基因的传递而构成潜在危害。同时，耐药性问题的加剧，迫使养殖行业不得不加大抗菌药物使用剂量、频次和范围，不仅造成耐药性的恶性循环，更引入了药物残留的问题。因此，加强抗菌药物的耐药性监测工作，合理用药，及早采取措施干预及控制细菌耐药性扩展是十分有必要的。一般情况下，大肠杆菌作为条件性致病菌和常在菌往往显示出细菌的耐药状况。为此，选择上海地区3个鸡场对大肠杆菌的耐药性进行了监测。
1材料与方法
1.1实验细菌菌株与材料
质控菌株：大肠杆菌，ATCC25922，中国兽医微生物菌种保藏中心，；饲养场分离菌株，大肠杆菌172株，由上海市兽药饲料检测所生物测定室2009年分离自上海3个鸡饲养场；营养琼脂、营养肉汤、麦康凯琼脂和Mueller-Hinton肉汤，OXIOD公司；API20E试纸，BIOMERIEUX公司；冻干型肠道菌定量药敏（MIC）检测板，中国兽医药品监察所提供。
1.2实验方法
1.2.1样本采集
以灭菌棉签拭采鸡肛（泄殖腔）和拭子蘸取新鲜粪便，分别对上海地区3个鸡场进行采样，在采样同时，询问饲养场的生产管理情况、疫病发生情况及抗菌药物使用情况（包括治疗用药及抗菌促生长剂）。
1.2.2细菌分离与鉴定
按常规方法接种于麦康凯琼脂平板，37℃培养24h，观察菌落生长情况。挑取粉红色、边缘光滑的大肠杆菌可疑菌落，用麦康凯培养基纯化一代后接种鱼营养琼脂平板，37℃培养24h，以API20E鉴定系统进行鉴定。
1.2.3药敏试验与结果判定
药敏试验采用冻干型肠道菌定量药敏（MIC）检测板使用说明进行操作，结果判定及质量控制按照农业部发布的《肠道菌和金葡菌抗菌药敏感试验规程草案和判断标准》和国际公认的《临床和实验标准化委员会》（CLSI）标准执行。
2结果与分析
2.1细菌分离情况
从3个鸡场中共采集样品180份，分离鉴定得到172株大肠[2]杆菌，分离率为95.6%。三个鸡场所占比率分别为95.0%、95.0%、96.7%。结果见表1。
表13个鸡场大肠杆菌分离情况
鸡 场 大肠杆菌
鸡场1 鸡场2 鸡场3
采样数 60 60 60
分离数 59 58 59
鉴定数 57 57 58
分离率（%） 95.0 95.0 96.7
2.2分离菌株药敏试验结果
鸡大肠杆菌对13种抗菌药物进行了药敏试验，其中耐药率在90％以上的有恩诺沙星（96.5％）、四环素（94.8％）、氨苄西林（94.2％）、庆大霉素（93.6％）、复方新诺明（91.3％）；80％以上的有阿米卡星（85.5％）、阿莫西林（82.0％）、氟苯尼考（80.2％）；70％以上的磺胺异噁唑（75.0％）、氧氟沙星（73.8％）；50％以的有头孢唑啉（52.3％）；40％以的有头孢噻呋（41.9％），而对粘杆菌素几乎全部敏感（99.4％），试验结果见2。试验结果表明上述3个鸡场对所检测的抗菌药物均产生不同程度的耐药性，且耐药性严重。
表2鸡大肠杆菌药敏试验结果
抗菌药 耐药(R) 中介(I) 敏感(S)
菌株数 比例(%) 菌株数 比例(%) 菌株数 比例(%)
氧氟沙星 127 73.8 29 16.9 16 9.3
恩诺沙星 166 96.5 6 3.5 0 0
四环素 163 94.8 9 5.2 0 0
庆大霉素 161 93.6 9 5.2 2 1.2
阿米卡星 147 85.5 13 7.6 12 7.0
氨苄西林 162 94.2 8 4.7 2 1.2
头孢噻呋 72 41.9 19 11.0 81 47.1
头孢唑啉 90 52.3 4 2.3 78 45.3
磺胺异噁唑 129 75.0 4 2.3 39 22.7
氟苯尼考 138 80.2 8 4.7 26 15.1
复方新诺明 157 91.3 1 0.6 14 8.1
阿莫西林 141 82.0 0 0 31 18.0
粘杆菌素 1 0.6 0 0 171 99.4
2.3不同鸡场大肠杆菌耐药性比较
3个鸡场分别对13中抗菌药物耐药性的比较情况见图2。由图2可知，3个鸡场大肠杆菌对氧氟沙星、恩诺沙星、四环素、庆大霉素、复方新诺明及氨苄西林的耐药率较为一致，均为严重；鸡场2与鸡场1和鸡场3比较，对阿莫西林、阿米卡星、磺胺异噁唑、头孢噻呋及头孢唑啉的耐药率低，但鸡场2大肠杆菌对阿莫西林（66.7%）、阿米卡星（69.8%）及磺胺异噁唑（71.6%）的耐药率仍较高；对粘杆菌素几乎全部敏感。
图1不同鸡场大肠杆菌耐药性比较
2.4鸡大肠杆菌耐药谱
受检的172株大肠杆菌对13种抗菌药物表现出不同程度的耐药性，最少的有3耐，多数为7耐以上的菌株。有16株（9.3%）为3耐；有32株（18.6%）为4～7耐；有123（71.5%）株为8～12耐；有1株为13耐（0.6%）。其中9耐菌株46株，所占比例最大（26.7%）；其次为10耐、11耐（分别占16.1%、10.0%），结果见图2。
图2鸡大肠杆菌多重耐药性
3讨论
3.1关于药敏试验和耐药谱
试验结果显示，所分离的172株鸡源大肠杆菌对抗菌药物的耐药性以多重耐药为主，耐药性较高的抗菌药主要是兽医临床使用频率较高的药物。这与鸡场由于疾病压力而大量使用抗菌药物或规模化鸡场饲料中长期添加抗生素或促生长剂，细菌的耐药性通过染色体或耐药质粒在细菌间传播和扩散有关。另外，应引起重视的是：第3代头孢菌素类（头孢唑啉，头孢噻呋）的耐药率也渐强；阿米卡星虽在兽医临床上未经批准使用，但也出现了较强的耐药率（85.5%）；兽医临床上使用时间较短的氟苯尼考，在检测中耐药率达80.2%。
这表明了大肠杆菌对其适应性产生速度之快，也提示兽医临床，抗菌药物的选择并非越新的药物效果越好，而是制定合理、有效的抗菌药物治疗方案，降低细菌耐药发生率。
3.2关于抗菌药物的使用方法
上述3个鸡场在生产中均存在一定程度的滥用药物现象,用药过程中的随意性,用药剂量和疗程没有按照兽医的建议或说明书；抗菌药物的选择上没有考虑采取联合用药、交叉用药、轮换用药的方式，均是造成大肠杆菌存在广泛的耐药性的原因之一。
参考文献
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