图4 重组阳性质粒在NCBI中的比对结果
注：A：300bp序列；B：644bp序列；C：950bp序列
图5 番茄白粉病菌CaM基因部分序列
2.5 系统发育树的构建
将该研究中得到的番茄白粉病菌钙调蛋白基因CaM的序列在NCBI的Blast数据库上比对，搜索同源性较高的序列，并建立系统进化树(图6)。由图可知，物种的进化导致不同物种的钙调蛋白基因序列具有一定的差异性。番茄白粉病菌钙调蛋白与核腔小麦白粉病菌钙调蛋白(Accession number: XM-001941096)聚在了同一支上，序列保守性较强，说明这两种白粉病菌钙调蛋白具有很高的亲缘关系。而番茄白粉病菌钙调蛋白与文昌鱼钙调蛋白(Accession number: AJ001919.1)聚在不同的两支，表明二者的同源性非常低。
图6 根据CaM序列构建的Neighbor-joining系统进化树
3. 讨论
钙调蛋白是一种耐热的小分子量酸性蛋白质[15]，并且还是植物细胞第二信使系统的重要组成部分[16]，其与Ca2+结合后作用于靶酶，从而改变细胞功能和酶的活性[17]。钙调蛋白广泛存在于各种真核生物细胞中，是Ca2+的受体蛋白，对任何微量的钙都能敏感地捕获，通常是以Ca2+-CaM复合物形式参与多种生化反应，从而参与细胞的调节[18]。因此，钙调蛋白作为第二信使在植物信号转导中的作用一直是植物生理、细胞生物学和发育生物学研究的热点。