高等植物染色体进化有一个显著的特征即染色体会加倍，植物染色体加倍后可以使植物的生态适应力和对逆境的抗性增强，主要表现为对环境的适应性增强、抗寒、抗旱及抗病虫害的能力增强[1-3]。目前，秋水仙素是使用最多、应用最广泛的化学诱导剂。在一定的浓度范围内，秋水仙素对培养材料没有特殊要求，能明显提高新生细胞的染色体加倍诱导率，经秋水仙素处理后的细胞在正常条件下又可以恢复正常分裂。诱导多倍体时，为了保证有较高的成功率，往往对秋水仙素的处理浓度和处理时间组合要求比较高[4]。因此，实验室急需解决的问题就是针对某种植物，选出最适合的诱导方法进行多倍体植株的诱导，并因此获得稳定生长的多倍体植株[5]。
本实验以蚕豆胚根膨大率和胚根诱导率为指标，再通过染色体的倍性变化，保卫细胞大小的变化及气孔大小对多倍体诱导结果进行确定，同时，对诱导出的蚕豆多倍体植株的胚根和幼苗的生长状况进行调查分析，旨在筛选秋水仙素诱导蚕豆多倍体的最佳处理浓度和处理时间组合，为秋水仙素诱导蚕豆多倍体提供最佳的实验方案。
1. 材料与方法
1.1 材料
蚕豆种子若干，由周口师范学院生命科学系提供。
1.2 器材
①仪器：恒温箱、显微镜、照相机等。
②试剂：酒精、秋水仙素培养液、改良苯酚品红溶液、蒸馏水、盐酸、次氯酸钠等。本文来自优*文^论'文/网，
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③低值易耗器材：培养皿、烧杯、试管、尺子、滤纸等。
1.3 方法
1.3.1 种子处理、胚根培养及秋水仙素处理[6]
将蚕豆种子洗净，用5%次氯酸钠消毒1h，在室温（25℃）下浸种24h后光照培养。胚根长至1.5cm左右时，选取长势一致的种子分成6组，分别用0.000%、0.025%、0.050%、0.100%、0.150%、0.200%的秋水仙素溶液浸泡，每组又分成4份，各份处理时间分别是12h、24h、48h、60h，“浓度×时间”共24个处理组合，以上每份处理50粒种子，处理后一半种子用于细胞学观察，一半土培，长出幼苗后调查苗高和胚根的数量。
1.3.2 形态学上对蚕豆多倍体诱导结果的鉴定
本实验通过统计胚根诱导率和胚根膨大率，在形态上对蚕豆多倍体诱导结果进行鉴定。胚根膨大率（%）=（根尖膨大后离根尖2cm处的周长﹣对照组相应位置的周长）／对照组相应位置的周长×100。根尖诱导率（%）=诱导膨大的根尖／对照组根尖总数×100 [7]。当蚕豆根尖处理到第10d和第15d时分别调查各处理组的胚根数量和苗高。
1.3.3 细胞学上对蚕豆多倍体诱导结果的鉴定
本实验通过在显微镜下调查胚根细胞染色体数目、气孔及保卫细胞大小和数量对蚕豆多倍体诱导结果进行细胞学上的鉴定。胚根细胞染色体数目的鉴定方法为：取各处理组胚根20条，用卡诺氏固定液固定10h后用蒸馏水冲洗2～3min，然后用l mol／L的盐酸在60℃水浴中解离20min，蒸馏水洗涤3～5次，用刀片将蚕豆根尖纵切3～4片，最后用改良的苯酚品红溶液染色8～10min，压片后在光学显微镜下观察[8-9]。从每个处理中随机选择20个制片进行统计，共统计100个处于分裂中期的细胞以及其中染色体加倍的细胞。气孔及保卫细胞数量的鉴定方法为：各处理幼苗长出2～3片幼叶后，用刀片把第2片幼叶的上表皮及叶肉刮去，剩余的下表皮用改良的苯酚品红溶液染色，光学显微镜下观察气孔及保卫细胞的大小，并调查10×40倍光学显微镜下20个视野内的各处理平均气孔及保卫细胞的数目。
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