河南省东南部,一年四季,温差大,光照足,降水丰,是全国重要的粮食生产基地。周口坐拥良田1280万亩,粮食常年产量150亿斤左右,约占河南省粮食总产量的1/7。但油菜种植面积很小,年均面积为1.2万h㎡,总产量为3.59万t。油菜具有较高的营养价值,富含人体必需的多种重要的营养成分,如胡萝卜素、文生素C、钙和铁等。油菜还有美容,促进人体血液循环,降血脂,消肿活血等功效。据近几年国外研究发现表明,油菜等十字花科植物对人类防癌抗癌具有一定的疗效。由此可见油菜具有特殊的功效和生物活性。为了深入探索油菜的功能特性,就需要从分子生物学水平分析研究其遗传物质DNA。DNA分子贮存有能控制生物所有蛋白质的全部遗传信息,因此研究油菜DNA对于人类更透彻了解油菜的独特功效及以后为油菜的开发和利用提供了有力的科学实验研究依据。其中提取高质量、高纯度的油菜DNA是进行现代分子生物学研究的一个重要的前提和步骤。
植物DNA的提取在植物基因工程以及植物分子生物学研究中占据重要地位。DNA的提取效率,尤其是DNA的纯度对实验结果的影响较为明显。同一植物不同器官采用不同方法提取DNA,则DNA的提取率和纯度都有差异显著。因此,分别确定出同一植物不同器官的最适DNA提取方法,对植物基因工程及植物分子生物学研究奠定了有利的基础。因为油菜具有幼嫩茎叶,而且据研究表明同一植物的不同器官的基因组DNA含量及提取率等均有所差异,所以选取甘蓝型油菜的幼叶和幼茎均分别采用CTAB法和SDS法来提取其基因组DNA,并确定出油菜幼叶和幼茎的最适DNA提取方法,具有一定研究价值和创新意义,且有利于后续分子生物学操作。
1.材料与方法
1.1实验材料
甘蓝型油菜。
1.2实验试剂
1.2.1CTAB法提取油菜DNA所需试剂
2%CTAB抽提液、2%CTAB(m/V)、含10μg/mL RNase A的TE缓冲液、70%乙醇、Tris饱和酚、酚/氯仿/异戊醇(V:V:V=25:24:1)、异丙醇、5mol/L KAc溶液。
1.2.2SDS法提取油菜DNA所需试剂
SDS提取缓冲液、SDS裂解液、含10μg/mL RNase A的TE缓冲液、无水乙醇、70%乙醇、Tris饱和酚、氯仿/异戊醇(V:V=24:1)、异丙醇、5mol/L KAc溶液。
1.2.3紫外分光光度法所需试剂
TE缓冲液、蒸馏水。
1.2.4琼脂糖凝胶电泳所需试剂
琼脂糖(电泳级)、0.5×TBE缓冲液:5×TBE缓冲液稀释10倍、6×加样缓冲液:0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,30%甘油,溶于蒸馏水中,4℃贮存、10㎎/mL溴化乙锭溶液。