大叶黄杨(Euonymus japonicus Thunb)卫矛科,卫矛属。大叶黄杨属常绿灌木或小乔木,小枝略为四棱形,树叶密生,树冠球形,四季长青是绿化带中常见的绿篱或观赏植物。白粉病的病发既会对大叶黄杨的发育生长产生影响,也会使大叶黄杨景观欣赏价值大大降低,1948年,四川有大叶黄杨白粉病记载[1],1995年大叶黄杨在山东的发病率达41%[2],2002年江西也有此病报道[3]。白粉病自幼苗到成穗都能发病,主要伤害植物叶片,茎和穗子。在植物叶片上开始产生黄色小点,之后扩大发展成类似圆形或椭圆形病斑,在植物的表面生有白色粉状霉层。一般是下部的叶片比上部的叶片多,叶片的背面比正面的多。河南省白粉病病菌在平原地区通常不能越夏,但在海拔500米以上山区的自生麦苗或夏麦上子囊孢子或分生孢子可发生为害,秋后通过气流传到平原麦苗上引起发病。引起大叶黄杨白粉病的真菌属于子囊菌白粉菌目,病菌以菌丝体在寄主的芽内越冬或以分生孢子在病叶上越冬,翌年从春季至秋季均可发病,温暖而干燥的气候条件有利于病害的发展。大叶黄杨易受白粉病危害的是嫩叶和新梢,其最明显的症状是在叶面或叶背及嫩梢表面布满白色粉状物,后期渐变为白灰色毛毡状,严重时叶卷曲,枝梢扭曲变形,甚至枯死[4]。
由此笔者在此基础上对大叶黄杨白粉病生理生化进行研究,对其在白粉病病发前后叶绿素含量、POD、SOD、丙二醛含量、脯氨酸含量通过不同的方法进行测定。本文来自优)文^论(文/网,
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1.材料和方法
1.1材料采集
2013年4月中旬在周口公园分别采集了大叶黄杨同株、同部位、同高度的具有典型明显白粉病特征的嫩叶及健康未染病植株的嫩叶。
1.2实验器材
722型分光广度计、离心机、电子天平、研钵、搅拌器、剪刀、棕色容量瓶、试管、量筒、40W荧光灯、10ml带塞刻度试管、量子辐射照度计。
1.3实验试剂
77.12 µmol/L NBT、0.1mmol/L EDTA、13.37mmol/L蛋氨酸、20µmol/L核黄素、2ml 10%TCA和少量石英砂、0.5mol/L pH 5.5磷酸缓冲液、0.05mol/L愈创木酚溶液、2% H2O2、0.1mol/L儿茶酚、20%三氯乙酸、80%丙酮、无水乙醇、CaC03、 石英砂、3%磺基水杨酸水溶液、甲苯、2.5%酸性茚三酮显色液、脯氨酸标准溶液。
2.实验方法
2.1叶绿素的制备及含量测定
取植物叶片,去除表面污渍,把中脉去掉剪碎然后混匀,取剪碎的样品约0.2g,放在研钵中研磨,加入少量碳酸钙粉、石英砂以及2-3ml 80%丙酮,研成均浆,再加丙酮10ml,直到研磨组织变白。拿1张滤纸,置漏斗中,用丙酮湿润,沿玻棒把叶绿素提取液倒入漏斗中,过滤到25ml棕色容量瓶中,用少量丙酮冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取丙酮,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中,直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用无水乙醇定容至25ml,摇匀,把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内,以80%丙酮为空白,在波长663nm、652nm、645nm下测定吸光度,测出带有白粉病的叶子和未带病叶子的叶绿素含量[5]。用722型分光广度计测定叶绿素提取液在663nm、652nm、645nm处的光密度,用公式(1)和公式(2)计算叶绿素的总量。
Ct=D652*1000/34.5............................................................................................(1)
叶绿素含量=Ct*提取液总量*稀释倍数/样品中*1000....................................(2)
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