粗毛栓菌木聚糖酶cDNA的RT-PCR+扩增cDNA片段
目录摘要1关键词1Abstract1Key words1引言11 □主要仪器、试剂与材料21.1□ 主要仪器、试剂 2
1.2□ 材料 2
2□ 方法3
2.1□ 菌种的培养3
2.1.1 □培养基的配置3
2.1.2 □菌种的接种3
2.2 □ RNA的提取 3
2.2.1 □实验前的准备3
2.2.2□ 提取RNA3
2.3□ 总RNA的纯度与浓度的测定4
2.4 □总RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测4
2.4.1□ 电泳药品配制4
2.4.2 □总RNA的电泳4
2.5 □RT-PCR4
2.5.1□ RT-PCR过程4 2.5.2□ CR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳5
3 □结果与分析 5
3.1 □总RNA电泳结果5
3.2 □总RNA纯度与浓度的检测结果6 3.3□ 木聚糖酶cDNA的PCR扩增及检测6
4 □讨论6
4.1□ PCR扩增结果6
4.2□PCR扩增结果 7
5 结束语□ 7
参考文献□7
致谢□7
图12原文请找腾讯752018766优,文-论'文.网http://www.youerw.com
图26
粗毛栓菌木聚糖酶cDNA的RT-PCR扩增
生物科学专业学生 燕涛
指导教师 孙迅
摘要 本实验以半纤文素作碳源培养粗毛栓菌9-12d，收集菌丝体，提取总RNA，做RT-PCR，扩增出两条木聚糖酶cDNA片段。
关键词 粗毛栓菌；木聚糖酶cDNA；RT-PCR
PCR Amplification of Xylanase cDNA in Trametesec gallica
Student majoring in Biology Yan Tao Tuto Sun Xun
Abstract: Total RNA was extracted from Trametes gallica Fr. cailtiated for 12 days in hemicellulose medium. RT-PCR was carried out at tow cDNA fragments were amplified.
Key words Trametes gallica, xylanase cDNA, RT-PCR
引言
木聚糖是存在于自然界中的丰富再生资源之一, 木聚糖酶是指能专一降解半纤文素木聚糖为低聚木糖和木糖的一组酶的总称, 主要包括三原文请找腾讯752018766优,文-论'文.网http://www.youerw.com 木糖和木二糖, 有助于木聚糖彻底降解为木糖[10]。木聚糖酶在饲料、食品、造纸、纺织和能源等工业中显示出广阔的应用前景, 其中一个较重要的用途是作为饲料添加剂应用于饲料行业。
PCR技术即聚合酶链反应，是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。在分子生物学基础研究上，PCR被广泛地用于基因克隆和制造突变。RT-PCR技术现已成为国内外研究的热点，在基础研究方面不仅可以扩增目的基因，还可对基因组测序，用反向PCR方法填补拼接时留下的“缺口”（gap）。 RT-PCR技术不仅可用于RNA分析，还可用于检测活动性的隐性病毒感染等。本课题主要是在对粗毛栓菌木聚糖酶的分布、来源、结构、性质及其功能等各方面有了深入了解的基础上，通过RT-PCR技术，对木聚糖酶的cDNA进行扩增。
1 主要仪器、试剂与材料
1.1 主要仪器、试剂
主要仪器：冰箱，高压蒸汽灭菌锅，震荡培养箱，生化培养箱HPS-160（哈尔滨东联电子技术公司），SZ-1型快速混匀器(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂)，5417-R型Eppendorf 离心机（德国），电泳仪DYY–8C型（北京优一仪器厂），电泳槽：DYY–III–31A型（北京优一仪器厂），TP600梯度PCR仪（日本TaKaRa公司），100ml玻璃研磨器，FR-200紫外与可见分析装置（上海复日科技有限公司），EP管，移液枪。
研究中的主要试剂有：半纤文素，酵母粉，微量元素，氯仿-苯酚混合物，异丙醇, 乙酸铵， 75%冰冷乙醇， 37%甲醛，溴乙锭（0.5g/mL）， 酒石酸铵，Mg2SO4•7H2O，10×PBS[9]（Na2HPO4 11.5g， KH2PO4 2g， NaCl 80g， KCl 2g溶于1L灭菌去离子水中，1×PBS的pH为7.4），DEPC水, 柠檬酸饱和酚，酚氯仿异戊醇混合物（25:24 :1)，异硫氰酸胍，5×甲醛胶缓冲液[9]{ 0.1mol / L MOPS [ 3—(morpholino) propanesulfonic acid ] pH7.0；40 mmol ∕ L 乙酸钠；5mmol ∕ L EDTA , pH8.0}，细胞裂解液{内含CBS(柠檬酸/SDS/ β-巯基乙醇)}，EDTA；6×上样缓冲液，10×上样缓冲液，琼脂糖，反转录试剂盒（日本Takara公司）；PCR扩增试剂盒（日本Takara公司），TAE缓冲液，250bp-DNA-Ladder-Marker（日本Takara公司）等。1830