本次实验主要是测定本次试验主要测定氨基酸型肠内营养剂内胆碱的含量。因它在氨基酸型肠内营养剂含量很少,且胆碱含量多少对人体的生理功能有一定的影响,故测定氨基酸型肠内营养剂中的胆碱含量就非常重要。 原文请+QQ324,9114优.文^论,文'网
1.4不同测定方法的比较与最终选定
现有许多测量胆碱含量的方法[1]- [12], 如银量法[1]- [2]、凯氏定氮法[1]- [2]、薄层色谱扫描(TLC)法[3]、 正相高效液相色谱(HPLC)法测定 [4] - [5]、反相高效液相色谱(RP—HPLC)法[6] 、 毛细管气相色谱法[7]、SPE-分光光度法[8]、紫外分光光度法[9] [10][12]等。
银量法,杨鸿雁通过测定样品中的氯含量,根据氯在氯化胆碱中的百分含量来换算氯化胆碱的含量,以铬酸钾为指示剂,用硝酸银滴定氯离子,当开始析出砖红色沉淀时即为终点。
凯氏定氮法,杨鸿雁在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使氯化胆碱转化成硫酸铵,加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定测出含氮量,根据氮在氯化胆碱中的百分含量来换算氯化胆碱的含量。
薄层色谱扫描法, 杨路平,王唯红,张君仁采用均匀设计法选择展开剂,分离出大豆卵磷脂7个组分,蛋磷脂2个组分,并采用薄层扫描法对磷脂酰胆碱进行了定量分析。
正相高效液相色谱(HPLC)法测定, 张云光 ,卢安根 ,莫建光 ,徐慧应用高效液相色谱法(HPLC)测定畜禽肉中磷脂酰胆碱含量。以Intertsil SII 硅胶柱(4.6mm×250mm,5μm)为分离柱,甲醇:水(85:15,V :V)为流动相等度洗脱,流速1.5ml/min,柱温为室温,用紫外检测器在206nm 处对磷脂酰胆碱进行测定。
反相高效液相色谱(RP—HPLC)法, 吴丽芹,邵荣,云志采用反相高效液相色谱对卵磷脂进行测定,选用了C18柱,用甲醇/7,腈/水作为流动相,紫外吸收检测器检测,确定了最佳检测条件:流动相甲醇/乙腈/水的比例为25/70/5(WWV),检测波长为206 nm,流速0.6 mL/min。
毛细管气相色谱法,张骊,赵玉,杨更亮采用毛细管气相色谱法,以环己醇作为内标物,使用AT.SE一54毛细管色谱柱,程序升温,N:为载气,不分流进样模式,氢火焰离子化检测器(FID)检测。
SPE-分光光度法, 丁明,钟冬莲建立了花粉中总胆碱的测定方法。花粉经Ba(OH):.甲醇一CHC13溶液提取,过弗罗里硅土固相萃取小柱净化处理后,利用雷纳克铵盐与胆碱可生成红色复盐的反应,分光光度法测定了花粉中胆碱含量。
紫外分光光度法,关明,李燕,赵淑贤采用丙酮、乙醇将卵磷脂分离出来,以卵磷脂正己烷溶液与0.5%碘-正己烷溶液反应,用紫外分光光度计在292nm处测定反应液的吸光度,磷脂酰胆碱的含量与吸光度成正比。
但这些方法大多烦琐费时,而且回收率效果不佳,有一定局限性。对比如下:
(1)银量法不适合掺有水溶性氯化物的样品测定;
(2)凯氏定氮法不适合掺有某些含氮化合物的样品测定;
(3)薄层色谱扫描法测量胆碱含量虽简便、快速、经济,但线性范围:
10—35g(r=0.9954)不太好,平均回收率95.3%,回收率效果不佳;
(4) 毛细管气相色谱法, HPLC 法测定,,反相高效液相色谱(RP—HPLC)法,虽然线性关系都在(r=0.999 7)以上,平均加样回收率为99.7%左右,相对标准偏差(RSD)为1.07%左右。线性与回收率都比较好,该方法简便,准确,重现性好,精密度高,但测量过程耗费大量试剂和时间, 因此不采纳。
(5)紫外分光光度法测量波长范围在紫外区﹙<400nm﹚,但本次实验要求测量波长范围为500nm,不在紫外区,因此不采用紫外分光光度法。原文请+QQ3249'114优.文^论,文'网
因为本次实验日本厂家给广东省药品检验所提供相关实验资料及要求采用分光光度法测定氨基酸型肠内营养剂中的胆碱吸光度,因此重新拟定新方法测定氨基酸型肠内营养剂中的胆碱吸光度。该方法较简便,准确,经济, 而且在2.5~12.7μg/mL浓度范围内,吸光度与浓度呈良好的线性关系(r = 0.9997),加标回收率为95.33-104.05%(RSD = 2.8%),方法具有良好的重现性和稳定性,因此本次从试验采用分光光度法.
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