分别称取0.20g干样放入10个20mL具塞试管中（试管标记和花青素测量时标记一样），加入10mL 50%甲醇，盖塞，摇床振荡提取10h，将提取液过滤到25mL容量瓶中，再用50%甲醇冲洗滤渣定容至25mL，各管加0.5mL 5% 的NaNO2，摇匀，静置5min后再加0.5mL 10% Al(NO3)3，摇匀，静置6 min后再加2mL 4％的NaOH，混匀，放置10min。在510nm下测定吸光值，计算类黄酮含量（以芦丁为标样制作标准曲线）。
③脯氨酸含量的测定[33]
从9个处理组和1个对照组中各称取小麦叶片0.3g，剪碎，加入适量的80% 乙醇，少量石英砂，于研钵中研磨成匀浆。分别将匀浆液全部转移至25mL刻度的10支试管中，用80%乙醇洗涤研钵，将洗涤液移入相应的刻度试管中，最后用 80% 乙醇定容至刻度，混匀，80℃水浴中提取20min。吸取上述提取液2mL于刻度试管中，再取一支刻度试管，加入2mL 80% 乙醇作为参比，分别向上述各试管中加入2mL冰醋酸和2mL茚三酮试剂，沸水浴中加热15min，冷却后用分光光度计测定520nm处各样品的光密度，以脯氨酸溶液制作标准曲线，计算脯氨酸含量。
④可溶性糖含量的测定[34-36]
从9个处理组和1个对照组中分别取小麦叶片，擦净表面污物，剪碎，各称取0.10g，分别对应放入10支刻度试管中，加入5mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤到25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。吸取0.5mL样品液于试管中（设3次重复），加蒸馏水1.5mL，按顺序分别加入1mL 9％的苯酚溶液，摇匀，再加入5mL浓硫酸，摇匀，比色液总体积为8mL，恒温下放置30min，在485nm波长下测定吸光度。以葡萄糖溶液为标准曲线计算出可溶性糖的含量。
⑤可溶性蛋白含量的测定[37]
从9个处理组和1个对照组中分别称取小麦叶片各0.20g，加0.1mol/L的磷酸缓冲液(pH=7.0)1mL(分3次加，0.33mL/次)，2～4℃下研磨，12000r/min离心5min制备粗酶液，吸取样品提取液0.1mL，分别加入到10mL试管中，再分别加入5mL考马斯亮蓝G-250，震荡使之充分混合，放置2min后，取待测液在595nm下比色测定吸光值，根据标准曲线查出相应的蛋白质浓度，计算出蛋白质含量。以牛血清蛋白标准液做标准曲线。
1.3.5 数据统计
计算上述各处理组和对照组紫外吸收物质及渗透调节物质含量，每个样品均重复测定3次，求取平均值并应用EXCEL软件作图分析。
2. 结果与分析
2.1 铅镉和紫外线胁迫处理下花青素含量的变化
铅镉、紫外线单一胁迫及复合胁迫下花青素含量的变化见图1。从图1可以看出，与对照相比，各种胁迫处理下小麦叶片中花青素含量均呈现下降趋势。紫外线和铅镉复合胁迫处理（处理组7、处理组8、处理组9）下，花青素含量降低最明显，其中处理组7降低了54.3%，处理组8降低了59.8%，处理组9降低了69.5%；紫外线胁迫处理（处理组4、处理组5、处理组6）对小麦叶片中花青素含量的影响次之，其中处理组4降低了43.2%，处理组5降低了46.0%，处理组6降低了58.4%；铅镉胁迫处理（处理组1、处理组2、处理组3）下，花青素含量变化最小，其中处理组1降低了23.8%，处理组2降低了32.1%，处理组3降低了41.8%。
图1 铅镉和紫外线胁迫处理下花青素含量的变化
2.2 铅镉和紫外线胁迫处理下类黄酮含量的变化
铅镉、紫外线单一胁迫及复合胁迫下类黄酮含量的变化见图2。从图2可以看出，与对照相比，铅镉胁迫处理（处理组1、处理组2、处理组3）下，小麦叶片中类黄酮含量呈下降趋势，其中处理组1降低了13.8%，处理组2降低了27.6%，处理组3降低了37.9%；紫外线胁迫处理（处理组4、处理组5、处理组6）下，类黄酮含量呈先升高后下降趋势，其中处理组4升高了17.2%，处理组5升高了10.3%，处理组6降低了31.0%；紫外线和铅镉复合胁迫处理（处理组7、处理组8、处理组9）下，类黄酮含量与对照相比均下降，其中处理组7下降了24.1%，处理组8下降了17.2%，处理组9下降了41.4%。
上述数据分析表明，本实验设定的铅镉浓度胁迫下及复合胁迫下，类黄酮的形成均受到抑制，而一定辐射剂量的紫外线胁迫能促进类黄酮的形成，这体现了小麦在逆境下的应急反应，当紫外辐射剂量增加后又会抑制类黄酮的形成。
图2 铅镉和紫外线胁迫处理下类黄酮含量的变化
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