于大鼠造模48h小时，分离麻醉后的大鼠颈部组织，使大鼠右侧颈总动脉暴露出来。经右侧颈总动脉抽取大鼠3ml动脉血液，采用颈椎脱臼法处死大鼠。1ml大鼠动脉血入EDTA抗凝管行血气分析检查；余2ml血液于离心机离心(3000×g ，4℃，16 min)后，吸引大鼠上层血清，分装至液氮容器中，移入-70℃低温冰箱中保存备用。
5.3 肺组织标本的留取
将处死的大鼠肋骨用手术剪刀加开，暴露各组大鼠胸腔，分离肺组织观察，了解各组大鼠肺组织形态的差异。钳取大鼠右肺上叶、下叶肺组织。上叶肺组织放于无菌纱布上，吸干肺组织表面血液后，称湿重；然后将肺组织置于微波炉烘烤5 min，测量肺组织干重，通过肺组织干重与湿重的比值计算大鼠肺干湿重比。右肺下叶肺组织先在4%甲醛溶液中固定，后将切片用石蜡包埋。HE染色后，在光学显微镜下观察各组大鼠病理差异。
6 病理切片的制作
首先切片在4%甲醛溶液固定，用石蜡将切片包埋，于HE染色后，在光镜下观察病理情况。HE染色方法如下：
(1)60℃烤箱中熔蜡(43-58分钟)；
(2)先后用二甲苯I、II脱蜡，各10 min；
(3)梯度酒精脱水，3 min；
(4)用蒸馏水冲洗，3min；
(5)苏木素染色，5 min；
(6)蒸馏水冲洗，3-4 min；
(7)盐酸、氨水中分色，各2-4 秒
(8)流水冲洗后，入蒸馏水片刻；
(9)70﹪酒精、90﹪酒精脱水，各10min；
(9)用酒精伊红染色液染色，2-4分钟；
(10)通过纯酒精脱水，3min；
(11)使用二甲苯I、II，让切片透明；
(12)在切片上滴中性树胶，然后封片。
7 ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6，肺泡灌洗液内SP-A的含量
通过酶联免疫吸附法测定血清中TNF-α、IL-6，肺泡灌洗液内SP-A含量。操作方法按照试剂盒内说明书严格操作。具体步骤如下所述：
(1)取出冰箱中已备试剂盒，在室温下放置25分钟。
(2)根据使用说明用蒸馏水将洗涤液稀释为原洗涤液浓度的5%.
(3) 取待测样本，将准备好的酶标板放置于实验台上，分别设待测样本孔、标准品孔、空白对照孔位置，在各组孔周围做上标记。待测样本孔依次加入待测样本10uL、样本稀释液40uL；在标准品孔放入标准品50uL；空白对照孔不做处理。本文来自优.文,论-文·网原文请找腾讯324,9114
(4)将水浴锅温度调至37℃，样本放内28min温育。
(5)弃去锅内液体，取出酶标板，在吸水纸上拍除样本表明液体。洗涤液加满每孔，静置2min去除洗涤液，置于吸水纸上拍干洗板表层液体。如此反复洗板4次，而后拍干。java利用get与put成员函数完成文件的拷贝工作
(6)除空白对照组外，每孔分别放入酶标工作液50uL，轻轻晃动使其混合均匀。
(7)洗板置于37℃水浴锅内30min，用洗涤液清洗洗板，而后吸水纸拍干洗液。
(8)各孔依次加入显色剂A液、显色剂B液50uL，通过振荡器震荡30s混匀样液，置37℃黑室中避光显色16min。
(10)显色后取出酶标板，加入终止液使反应终止（可见各孔颜色由蓝色已转黄色，实验操作顺利）。
（11）在终止反应8min，将空白孔调零，450nm波长下测量各孔的吸光值（OD值）。
（12）标准品的浓度及其所对应的OD值已知，可通过计算标准曲线回归方
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