1。4影响分离度的因素

制备色谱包括进样装置、泵、制备柱、检测器与馏分收集器，其中制备柱的选择很重要。色谱分离纯化过程中的分离情况常常用色谱柱的分离度来表示，分离度越大，表示相邻两个色谱峰就分得越开。分离度又称分辨率，即相邻两个色谱峰保留时间之差的2倍与这两个色谱峰的峰宽之和的比值：

1。5研究依据

其中 为柱效项； 为柱选择项； 为柱容量项

在液相色谱中，柱选择项和柱容量项都与色谱柱及流动相性质有关，但柱选择项主要取决于流动相的种类。

若想提高分离度，一般通过几种方法：

1 增加ΔtR，即两相邻组分保留时间的差值

<1 增加柱长；

<2增加固定相的量；

<3选择分离因子（如降低柱温、选择不同流动相）较大的色谱条件；

2 减小谱带宽度（峰宽）W

<1提高柱效，减小塔板高度：即使用颗粒更小更细的填料，更小心均匀的填充色谱柱；

<2减小色谱柱死体积；

<3减小进样量，防止色谱柱超载；

由以上可知影响分离度的因素，而我们在使用制备色谱时，采用串联色谱柱方法来增加柱长，填料均匀来提高柱效，为了进一步优化分离效果，本次试验从选择不同流动相和减小进样量来开展，从而找到最优分离方案。文献综述

1。6研究意义

随着各种活性多肽化学合成的不断发展，多肽的分离纯化也越来越重要，但多肽产物成分复杂，分离纯化难度也在不断增加。研究表明，反相液相色谱是目前分离纯化多肽的有效方法之一，与经典分离方法相比具有效果好，速度快，分辨率高，灵敏度，高有较强的适用性等优点。然而，目前反相液相色谱法尚不完善，费时费力，有待科研人员进一步优化其条件或找到一种较适合分离纯化多肽的方法。

研究表明，合适的体系，可以使目标物与杂质达到完美分离，避免主峰里包裹着杂质；而找到合适进样量与梯度则可以大大提高分离的效率，在满足纯度的情况下大大的缩短了工作时间。基于此我们用制备色谱仪研究了流动相体系，进样量与洗脱梯度对多肽的分离度的影响，为分离多肽优化条件提供了依据。