目前,已有对香樟籽色素的超声波辅助提取及其稳定性的研究[5],酶催化水解樟树籽油的研究[7],还未见到香樟果抗氧化活性的研究报导。本文对这些性质做初步研究,为香樟果的合理开发利用提供全面的理论依据。不仅可以变废为宝,减少环境污染,而且可以提高香樟果深加工产业的附加利用价值,增加加工企业的经济效益,具有重要的社会和经济意义。
2 实验部分
2.1 材料、仪器与试剂
材料:2012年10月采摘于淮师北校区。
仪器:旋转蒸发器、分析天平、粉碎机、恒温水浴锅、紫外/可见分光光度计、GCMS-QP2010SE岛津气质联用仪。
试剂:乙醇,Tris试剂;甲醇为色谱纯; DPPH(1,1- 二苯- 2- 苦肼基, C18H12N5O6)分析纯;,焦性没食子酸(邻苯三酚,C6H6O3),Folin-Phenol试剂,浓盐酸,碳酸钠,磷酸缓冲溶液,,邻二氮菲,硫酸亚铁,双氧水,去离子水。
2.2 样品的提取
称取烘干的香樟果500g进行粉碎。在香樟果丙酮提取液残渣中加入乙醇850ml进行冷凝回流4小时[3-4]。将提取液过滤,滤液进行旋转蒸发,冷冻干燥的产品约30.7g,产率为2.3%,作为待测样品,对香樟果乙醇提取残渣加800ml水进行冷凝回流4小时,提取液过滤,滤液进行旋转蒸发,冷冻干燥的产品约11.7g,产率为6.4%,作为待测样品。
2.3 样品溶液的配置
称取香樟果乙醇提取物0.2538g,乙醇为溶剂溶解定容于50ml容量瓶,得5.076mg/ml溶液。
称取香樟果水提取物0.2g,水为溶剂溶解定容于50ml容量瓶,得4.0mg/ml溶液。
2.4 总酚含量测定[8]
2.4.1 溶液的配制
焦性没食子酸溶液:准确称取焦性没食子酸5.0mg于50mL容量瓶中,加80%乙醇使溶解并稀释到刻度,摇匀,即得到浓度为0.1mg/mL的焦性没食子酸溶液。
Na2CO3溶液:称取2.000g Na2CO3于100mL容量瓶中,以蒸馏水定容,得20% Na2CO3溶液。
2.4.2 焦性没食子酸标准曲线的绘制
用移液管准确吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL的焦性没食子酸溶液分别置于10mL容量瓶中,再各加入蒸馏水6mL,Folin-Phenol试剂0.5mL,摇匀,静置5min,再各加20% Na2CO3溶液1.5mL,摇匀,室温下静置30min,用去离子水稀释到刻度,摇匀,以试剂空白为参比,在763nm处测定吸光度。
2.4.3 总酚测定方法
将香樟果乙醇和水提取液稀释10倍后分别取1 mL于10 mL容量瓶中,依2.4.2的方法测定样品的吸光度。然后根据标准曲线,计算样品中总酚的含量。
2.5 抗氧化性试验[9,11]
2.5.1 超氧负离子清除率的测定[9,11]
2.5.1.1 原理
利用邻苯三酚自氧化反应测定自由基清除剂对产生的超氧负离子自由基的清除作用。邻苯三酚在弱碱性(Tris-HCl缓冲溶液pH为8.2)环境中自氧化分解产生O2- ·的反应为:
邻苯三酚 → O2- ·+ 其他产物
该体系常用于测定SOD或类SOD活性物质对O2- ·的歧化活性。随着反应的进行O2- ·在体系中不断积累,导致在反应开始后一段时间之内,反应液在325nm波长处的吸光度随时间变化而线性增大。因此在该段时间内,于上述波长处,测定未加和加自由基清除剂后反应系统的吸收光谱分别为A0和A。
2.5.1.2 溶液的配制
Tris-HCl缓冲溶液(pH=8.2):取6.25 g Tris试剂溶于乙酸乙酯中,加浓HCl 2.00 mL,稀释至250 mL,得pH8.2的Tris-HCl缓冲溶液。
邻苯三酚溶液:称取0.0100 g邻苯三酚于25 mL容量瓶中,加80%乙醇使溶解并稀释到刻度,得0.00300 mol/L邻苯三酚溶液。
香樟果乙醇和水提取物的成分分析及其抗氧化活性的研究(3):http://www.youerw.com/huaxue/lunwen_61874.html