2 稻草酶水解液脱色工艺的研究

脱色处理是通过吸附剂孔壁上的大量的分子可以产生强大的引力，从而达到将有害物质吸引到孔径中的目的。同时，吸附剂吸附并不具有选择性，从而会使酶水解液中的含糖量降低。本实验用吸附剂为活性炭，活性炭吸附是应用最广，成本较低，效果较好的脱色方法。本试验采用活性炭脱色处理稻草酶水解液，重点讨论不同实验条件下对脱色率与含糖率效果的比较。通过测得的吸光度值来验证实验效果。

2.1 实验材料与方法

2.1.1 实验材料及实验设备

表2-1 本实验主要仪器设备及材料

名称及型号 厂家

UV1900系列紫外可见分光光度计 上海凤凰光学科仪有限公司

DK-600A电热恒温水箱 上海一恒科学仪器有限公司

T-214分析天平 DENVER INSTRUMENT

F20-H恒温反应器 上海申生科技有限公司

SKG电炉（红外电陶炉） 艾诗凯奇（中国）有限公司

盐酸（分析纯） 南京化学试剂有限公司

NaOH（分析纯） 南京化学试剂有限公司

葡萄糖（分析纯） 国药集团化学试剂有限公司

活性炭（颗粒） 天津市大茂化学试剂厂

活性炭（粉状） 江苏竹溪活性炭有限公司

2.1.2 实验方法

（1） 葡萄糖标准曲线绘制

1） DNS法测还原糖原理及DNS试剂的制备

DNS法测还原糖原理：DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。

DNS试剂的制备：将6.3克DNS（3,5-二硝基水杨酸）和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500mL含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000mL，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。

2） 还原糖测定

葡萄糖标准曲线制作：取 5 支 15mm×180mm 试管，按表2-2加入 2.0mg/mL葡萄糖标准液和蒸馏水。在上述试管中分别加入 DNS 试剂 2.0mL，于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水 9.0mL，摇匀，在540nm 波长处测定光吸收值。以1.0mL蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品中还原糖的测定：取2支试管进行编号，分别加入1 mL 还原糖待测液，1mL 的蒸馏水。然后每支试管都加入 2mL的 3，5―二硝基水杨酸试剂，最后置于沸水浴中加热 2min 进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水 9.0ml，摇匀，在 540nm 波长处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖量。

按下式计算还原糖百分含量：

式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL；V──还原糖或总糖提取液的总体积，mL；m──样品重量，g