2.4 固定化酶制备： 10

2.4.1 NIPAM/PHEMA半互穿网络水凝胶固化酶的制备： 10

2.4.2 NIPAM/PAEMA半互穿网络水凝胶固化酶的制备： 11

2.5 固定化酶性能测试： 12

2.5.1酶的固载量： 12

2.5.2 固定化酶活性、比活及活力回收率的测定[24]： 13

2.5.3 固定化酶操作稳定性和热稳定性的测定[27]： 14

3 结果与讨论 15

3.1 水凝胶载体 15

3.1.1 NIPAM/PHEMA半互穿网络水凝胶扫描电镜SEM： 15

3.1.2 NIPAM/PAEMA半互穿网络水凝胶扫描电镜SEM： 15

3.1.3 胺化的PHEMA与未胺化的PHEMA红外光谱图FTIR： 16

3.1.4胺化的与未胺化的 NIPAM/PHEMA半互穿网络水凝胶红外光谱图FTIR： 16

3.1.5 NIPAN/PAEMA半互穿网络水凝胶红外光谱图FTIR： 18

3.1.6 水凝胶溶胀比（SR）测定： 19

3.1.7 水凝胶的保水率（WR）及去溶胀动力学曲线测定： 20

3.1.8 水凝胶的吸水率（WU）及再溶胀动力学曲线测定（25 ）： 21

3.2 固化酶 22

3.2.1脂肪酶的固载量： 22

3.2.2固定化酶活性、比活及活力回收率的测定： 23

3.2.3固定化酶操作稳定性和热稳定性的测定： 24

结 论 25

致  谢 26

参考文献 27

1 引言 

1.1 温敏性水凝胶：

温敏性凝胶指的是体积随温度变化的高分子凝胶，可分为高温收缩型凝胶和低温收缩型凝胶两类。目前，研究最为广泛的温敏凝胶是热缩型的N-异丙基丙烯酰胺( NIPAM) 系水凝胶[6]。N-异丙基丙烯酰胺（NIPAM）是温度敏感凝胶的主要构建部分。聚合物本身是一种水溶性聚合物，它必须包含一种交联物以防止凝胶在低温下溶于水。交联聚合物（NIPAM）在高于LCST（低临界溶液温度，在32-34℃左右）时膨胀，在低于此温度范围时收缩。这是由于聚合物链在水合和脱水状态下的相变导致的[7]，低临界溶液温度可以有效控制，即将带电单元和疏水单元纳入到聚合物链中。带电的残基通常会提高低临界溶解温度，而疏水残基降低低临界溶解温度。

以温度敏感水凝胶为固定化酶载体能使反应物与底物同时分离[8]，将某些产物对酶的抑制解除；同时，还可以控制固定化酶的使用等。这是由于温度敏感水凝胶具有一个LCTS（低临界溶解温度），当溶液温度在此温度左右变化时，凝胶对酶的活性有一个“开/关”效应，当温度在LCTS以下时，凝胶溶胀，底物进入凝胶内部与酶发生反应，此时为“开”；当温度在LCTS以上时，凝胶发生退溶胀，阻止底物进入凝胶内部与酶发生反应，此时为“关”。因此，当一种酶被固定在热敏性聚合物上时，由于环境的变化产生的聚合物构象的急剧变化，能显著影响酶的活性和接近酶分子的底物。