波长的选择对提高检测的灵敏度非常重要，利用二极管阵列检测器多波长检测功能，设置三个检测通道，分别在201 nm，227 nm和254 nm下同时测定，苯甲酸钠在201nm波长处吸收较强，山梨酸钾在254nm波长处吸收较强，根据紫外吸收光谱图综合考虑，可观察到苯甲酸钠和山梨酸钾混合物在227 nm处峰形较好，基线较稳定且基本实现基线分离，故选择227 nm为检测波长。
2.2 苯甲酸钠，山梨酸钾标准液及其混合物出峰情况的考察
    实验考察了在电压为15 kV，缓冲溶液浓度为8%微乳液+35mmol/L磷酸氢二钠的情况下，苯甲酸钠的出峰情况，山梨酸钾的出峰情况以及苯甲酸钠和山梨酸钾1:1混合物的出峰情况和分离情况。可得到标准混合物的分离谱图 ，从图中看出2种组分均可出峰，且在3 min内可达到基线分离，具有实验意义。此外，还可根据保留时间定性判断苯甲酸钠和山梨酸钾的出峰顺序和出峰时间。
        图1.混合标准液电泳图（未优化）
                1 山梨酸钾                  2 苯甲酸钠
 227 nm下，8%微乳液+35mmol/L磷酸氢二钠+蒸馏水为运行缓冲液，分离电压为15 kV

2.3 运行缓冲溶液的选择
    实验考察了在电压为15.0 kV，缓冲溶液浓度为35mmol/L磷酸氢二钠的情况下，不同微乳液浓度（6% ，8% ，10% ，12% ，14%）对分离效果的影响。结果表明，随着微乳液浓度的增大，分离时间变长，又考虑到电流，峰形，和综合分离效果，最终选择最佳的微乳液浓度为8%。实验又考察了在电压15.0 kV，缓冲溶液浓度为8%微乳液的情况下，不同磷酸氢二钠浓度（15，20，25，30，35，40mmol/L）对分离效果的影响。结果表明，随着磷酸氢二钠浓度的增加，分离效果提高，但浓度太高会使分离时间变长且电泳电流过大，影响分离测定，在节省分离时间的条件下，综合分离效果最终选择35mmol/L为最佳的磷酸氢二钠浓度。
2.4 分离电压的选择
    在恒温28 ℃，,压力进样20 psi，进样时间为5 sec，运行缓冲溶液浓度为8%微乳液+35mmol/L磷酸氢二钠，检测波长为227 nm的电泳条件下，考察了电压对峰形、分离情况的影响。在电压分别为13.0，15.0，17.0，19.0，21.0 kV下分离分析苯甲酸钠，山梨酸钾。实验发现，分离电压越大，分离时间越短，电泳电流越高。当电压值很大时，易发生断电流现象且杂质峰影响较强。电压过低时，峰形不好。经比较，在电压为17.0 kV时杂质峰影响较小，峰形好，分离效率高。所以确定最佳分离电压为17.0 kV。
2.5 日内迁移时间RSD和峰高RSD
    在所有优化条件下，对苯甲酸钠和山梨酸钾标准混合样（苯甲酸钠和山梨酸钾浓度比为1:1）连续平行测定6次，观察并分别计算苯甲酸钠和山梨酸钾的迁移时间和峰高的RSD，检测此方法的日内重现性。苯甲酸钠和山梨酸钾的迁移时间的RSD分别为0.0231和0.0355，苯甲酸钠和山梨酸钾的峰高的RSD分别为0.0187和0.0142。优化电泳条件下的苯甲酸钠和山梨酸钾的电泳图如图2所示： 化妆品中防腐剂的微乳液电动色谱预警方法研究(3):http://www.youerw.com/huaxue/lunwen_7420.html