可得然胶多糖/壳聚糖/纤维素复合膜对草莓保鲜抗氧化酶活性的影响(5)
时间:2018-07-20 22:58 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
在植物的保护酶系中, 超氧化物歧化酶( SOD) 是主要的活性氧清除酶系, 它催化超氧阴离子发生歧化反应, 生成 H 2O 2和 02 -•, 接着过氧化氢酶( CAT) 可将 H2O2 转化为无害的 H2O 和 O2。另外, 过氧化物酶( POD) 对活性氧的清除也起重要作用 由 SOD 、POD和 CAT 等酶所组成的保护系统控制, 它们的殊功能就是作为氧自由基的清除者，文持细胞内氧自由基的平衡[12]。 A液(0.2mol/L的Na2HPO4;溶液,IL):准确称取71.7克Na2HPO4•12H2O置于5O0mL 烧杯,用少量蒸馏水溶解,移入1000mL容量瓶,用蒸馏水定容至刻度,充分混匀。4℃冰 箱中保存备用。 B液(0.2mol/L的NaH2PO4溶液,1L):准确称取31.2克NaH2PO4•2H2O置于500ml 烧杯,用少量蒸馏水溶解,移入1000ml容量中用蒸馏水定容至刻度,充分混匀。4℃冰箱中保存备用。 选取一定部位草莓果肉1g,于预冷研钵中，加2ml磷酸缓冲液在冰浴下研磨成浆，加缓冲液使终体积为10ml,于10000r/min下离心10min，上清液即SOD粗提液 （1）超氧化物歧化酶SOD的测定(氮蓝四唑光化还原法) 准备5支试管（要求透明度好），一支对照，一支空白，按表1加入各溶液，混匀后将空白管置于暗处，其他各管于4000xl日光灯下反应20min[6]。 表1：各溶液加入量 试剂（酶） 用量（ml） 终浓度 0.05mol/L磷酸缓冲液 1.5 130mm/L甲硫氨酸溶液 0.3 13mmol 750μmol/L氮蓝四唑溶液 0.3 75μmo 100μmol/L EDTA-2Na溶液 0.3 10μmol 100μM核黄素 0.3 2.0μmol 酶液 0.05 空白、对照加缓冲液 蒸馏水 0.25 总体积 3.0 560nm处测量吸光度并代入公式1[6]计算： ACK —对照烧杯的吸光度值; AE —为样品的吸光度值; V —样液总体积; Vs —为测定时样液用量体积; 0.5 —抑制NBT光化还原的50%; W —测定的鲜重; G —SOD总活力单位为u/g。 （2）过氧化物酶POD的测定(愈创木酚法) 试剂1:100mmol/L磷酸缓冲溶液PBS（PH6.0） 试剂2：愈创木酚反应液（50mlPBS和28μl愈创木酚加热搅拌溶解，冷却后加入19μl30%H2O2，冷却后保存于冰箱备用） 取试管4支，一支取3ml反应液并加入磷酸缓冲液1ml作调零，其余作为样品管分别加入3ml反应液，1ml酶液，立即计时，在470nm处测定，每30s读一次，测一加一。 酶活的计算：以每分钟OD的变化（升高）0.01为1个酶活单位（u），见公式2[6]： KE—OD值增加速率； V一为样液总体积； VS—测定时样液用量体积； W—样本的鲜重。 （3）过氧化氢酶CAT的活性测定 试剂：0.2mol的磷酸缓冲溶液（PH7.0、100ml含1gPVP） 取4支10ml试管，一支空白，三支样品管。体系为3ml，每管0.2ml酶液、1.5ml磷酸缓冲液，1ml蒸馏水（空白管蒸馏水代替酶液），加入酶液后煮沸5分钟，冷却后加入H2O2测定吸光值。25℃预热后加入0.3ml 0.1mol/LH2O2，每加完一管立即计时，迅速倒入石英比色皿中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数一次，共测4min（调零用缓冲溶液） 酶活的计算：以 240nm 吸光值每min 减小0. 1为1个酶活性单位(u),见公式3[6]： KE—OD值降低速率； V一为样液总体积； (责任编辑：qin) |