库拉索芦荟汁对绿豆缓解废电池胁迫机制研究(2)
时间:2017-03-21 21:24 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1 材料和方法 1.1试验材料 绿豆，为绿豆豫绿4号(Vigna radiata L.Wilclzek Yulv4)，购于周口市农科院。 库拉索芦荟(Aloe vera)，于市场购买。 1.2材料处理 将2节5号电池剥开，放入烧杯中，加入1000ml的蒸馏水进行浸泡24h后，先用纱布过滤，再用滤纸过滤三遍，得电池浸出液母液。把废电池母液和蒸馏水按照1：4的比例稀释，得稀释液。另取2-3年生的库拉索芦荟叶片，洗干净，擦干，用不锈钢刀剥去叶片外皮，得到芦荟凝胶，再利用高速组织捣碎机将凝胶打成匀浆，再用四层纱布过滤得出库拉索芦荟汁。用1：4废电池将芦荟汁配成0，25，50，100，200g/L的溶液，并编号2-6，以1号(蒸馏水)为对照。 选择品相较好的，饱满的绿豆种子，用10%的NaClO消毒10 min后，用蒸馏水冲洗干净，将种子分为优尔份，每份50粒，重复三次，然后用含有不同浓度库拉索芦荟汁的废电池液浸种，48h后，种在相应编号含有等质量的经过筛选和翻晒的土壤的培养皿中，在室温下培养，在长出四片真叶后，选取同位叶测量指标，每样重复三次，在实验过程中，每48h浇一次相同编号的等量的溶液。 1.3生理指标的测定 1.3.1 游离脯氨酸含量的测定 采用磺基水杨酸浸提法[16]。称取0.2g绿豆叶片，放在试管中并加入磺基水杨酸溶液。沸水浴，10min后，取出并冷却，然后过滤。吸取2ml过滤液放在带塞试管中，并加入冰醋酸、酸性印三酮试剂，再次沸水浴，30min后，取出并冷却。然后加入甲苯，摇晃，取出上层液放入离心管中。于3000r/min，离心5min。离心完成后，取上层液在520nm处测吸光度，然后根据其标准曲线计算脯氨酸的含量。 1.3.2可溶性蛋白质含量的测定 采用考马斯亮蓝G-250 显色法[16]。称取绿豆叶片0.2g，加入0.1mol/l的磷酸缓冲液1ml，于低温下研磨，并于12000r/min离心得出待测液。取出0.1ml与5ml考马斯亮蓝溶液反应，放置5min后，以考马斯亮蓝溶液为对照，在595nm处测定吸光值。根据其标准曲线，计算出蛋白质的含量。 1.3.3电导率的测定 采用李合生的方法[16]，称取绿豆叶片0.2g，洗净，然后用无离子水冲洗三遍，吸干水分后剪碎，放入盛有20ml的无离子水的三角瓶中，用真空抽气泵抽气，然后在30℃下放置4h，使用电导率仪测量其电导率值，再将其放入沸水中加热15min，冷却并定溶至20ml，于25℃静置30min，再次测量电导率，并根据公式测量其相对电导率。 1.3.4丙二醛的测定 采用硫代巴比妥酸(TBA)法[17]。称取绿豆叶片0.2g，加入1ml的蒸馏水研磨，并转移到试管中，再加5ml的硫代巴比妥酸溶液，于沸水中放置10min，取出并放入冷水中冷却，然后在3000r/min的条件下离心15min，取上清液，并测其于450nm、532nm和600nm处的值，然后计算出丙二醛的含量。 测定结果采用EXCEL软件处理作图。 2 结果与分析 2.1库拉索芦荟汁对废电池胁迫下绿豆幼苗电导率的影响 植物细胞膜对于文持细胞的正常代谢有重要的作用，当受到逆境的胁迫时，细胞膜的透性增大，电解质外渗，植物细胞的浸提液的电导率就会增加。因此，可以用电导率的高低，代表质膜透性的大小，细胞膜的透性与胁迫程度有关，也与植物的抗逆性能力强弱有关。 图1 绿豆叶片的电导率大小的变化 如图所示，6组中相对对照组的电导率而言，废电池处理组的电导率有明显升高，是蒸馏水处理组的7.03倍，电导率的升高，说明了细胞膜的完整性有损伤，库拉索芦荟汁处理，使叶片的电导率明显下降。可以看出，随着库拉索芦荟汁的浓度的增加，叶片电导率的变化呈现出先降低后升高的趋势，在50g/L的时候，叶片电导率达到了最小值，比废电池处理组的减小了87.6%，芦荟汁浓度达到在100g/L时，电导率出现了明显的上升，甚至高于废电池处理组。说明一定浓度的库拉索芦荟汁，能缓解绿豆叶片细胞的电解质外渗，浓度过高或者过低，则会对缓解程度造成一定的影响。 (责任编辑：qin) |