真菌色素的传统提取方法如压棒法、粉碎法、回流法、有机溶剂提取法存在多种缺点， 如操作复杂、生产成本高、产品纯度低、有溶剂残留、热敏性组分被破坏等，对天然色素 的开发和应用产生了巨大的阻碍作用[11]。而大孔树脂吸附作为一种新型技术，具有物理化 学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处 理方便、使用周期长、节省费用等诸多优点[12]，在色素的分离提取中发挥着重要的作用[13][14]。本研究通过大孔树脂 D101 对绯红密孔菌发酵液中色素进行吸附，达到提纯色素的目 的。并且对色素总抗氧化性、清除 DPPH·、羟自由基能力进行检测，以期为天然红色素的 开发和应用提供理论依据。

2 材料与方法 

2。1 菌种 

绯红密孔菌（Pycnoporus coccineus），采自江苏省溧阳市天目湖南山竹海翠谷庄园板栗 林，本实验室保存。论文网

2。2 试剂和仪器

大孔树脂D101；无水乙醇；FeSO4·7H2O；VC；冰乙酸；无水乙酸钠；TPTZ；FeCl3；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）；水杨酸；30%过氧化氢；盐酸。Infinite ML00 Pro多功能酶标仪；5415R小型高速离心机；RE-3000D旋转蒸发仪 上海亚 荣生化仪器厂；ISO9001电子天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司；HH-W420三用恒温水 浴锅 金坛市正基仪器有限公司；SHB-III循环式多用真空泵；大孔树脂吸附柱。

2。3 方法 

2。3。1 发酵液制备 

母种活化培养基：PDA 固体培养基。液体培养基：土豆 200g，葡萄糖 20g，酵母膏 5g， 自来水 1000mL，将活化后的母种，接种于液体发酵培养基，25℃，120 r·min-1 恒温振荡， 避光培养 10d 后，得到液体发酵液。

2。3。2 发酵液处理 

发酵液在 4000rpm 下离心 10min，取上清进一步抽滤，滤液 55℃旋转蒸发浓缩至原体 积 1/3。

2。3。3 色素纯化 

称取 50g 大孔树脂 D101 于烧杯中，倒入无水乙醇至浸没，浸泡 24h 后装柱。用超声 过的超纯水冲洗，直至无醇味。再向柱内加入 20ml 浓缩后的发酵液，静置 24h。 分别用 超纯水、20%乙醇、50%乙醇、无水乙醇洗脱至无色，收集洗脱液。55℃旋转蒸发至适当浓 度得到待测样品。设定各洗脱液样品的初始浓度为 100%。根据体积换算，则发酵原液浓 度相当于 6。67%经各级浓缩的洗脱液样品浓度。

2。3。4 色素抗氧化性研究 

2。3。4。1 总抗氧化能力研究 

采用铁离子还原/抗氧化能力分析法（FRAP）[15]测定色素提取液总抗氧化性。将 pH3。6， 300mmol/L 醋酸盐缓冲液、10mmol/LTPTZ 溶液与 20mmol/LFeCl3 溶液按照 10:1:1 比例混合， 即得 FRAP 工作液。反应体系中加入样品 50μL，FRAP 工作液 1。5ml，蒸馏水 150μL，混 合均匀，37℃水浴 10min，在 593nm 下测定吸光值，重复实验三次。文献综述 

绘制标准曲线时，用 0。1~3。2mmol/LFeSO4 标准溶液代替样品，采取上述方法进行实验。 以 FeSO4 标准溶液浓度为横坐标，A593 为纵坐标绘制标准曲线，根据各样品反应后在 593nm 处的吸光值，在标曲上求得对应 FRAP 值（mmol/L）。对应的 FRAP 值越大，抗氧化活性越 强。 

2。3。4。2 DPPH·的清除能力研究 

参考 Lee 和 Kim 方法[16]，对色素提取液清除 DPPH·能力进行研究。在反应体系中加入 1mL 样品和 1mL0。2mg/mL DPPH（0。01gDPPH 溶于 50ml 无水乙醇），混合均匀，室温黑暗放 置 30min，在 517nm 下测定样品吸光值（Ap）。分别用 1mL 蒸馏水代替 DPPH 和样品，测定样品空白吸收值（Ac）和对照的吸收值（Amax），重复实验三次。 按下列公式计算清除率：  绯红密孔菌色素纯化极其抗氧化性分析(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_197566.html