RNA是生物体的重要遗传物质，RNA在DNA到蛋白质的生物合成中起重要作用。RNA的提取也是分子生物学中的基础实验，实验室常用的细菌RNA提取方法有强变性剂法[2]、Trizol法[3]以及各种试剂盒法等。RNA提取的原理是裂解细胞后，通过添加不同试剂使RNA与蛋白质解离，然后除去蛋白质与其他杂质分子后用试剂抽提出RNA，从而将RNA从细胞中提取出来，期间要通过不同方法抑制RNA的降解。目前国内大部分RNA提取是针对真核生物而非细菌之类的原核生物，本文采取两种实验方法对细菌的RNA提取效果做出比较，并且对细菌攻毒宿主后的富集时间进行优化。

2 材料

2。1 菌株源F于K优B尔C论V文N网WwW.youeRw.com 原文+QQ752^018766

本实验使用的菌株E1是由本实验室保存的大肠杆菌的野生菌株。

2。2 主要试剂

本实验使用的试剂见表1。

表1 本实验中使用的试剂

试剂 外文名称或化学式 来源

醋酸钠 NaAc Sigma公司

氯化锂 LiCl Sigma公司

十二烷基硫酸钠 SDS Sigma公司

乙二胺四乙酸 EDTA Sigma公司

琼脂糖 AGAROSE BIOWEST

Goidview染料 —— 赛百盛基因技术有限公司

 

RNAiso plus试剂盒 —— 宝生物工程(大连)有限公司

 

其它常规试剂 —— 国产分析纯级产品

2。3 需配制的试剂

本实验中需使用部分自行配制的试剂，试剂说明见表2。

表2 自行配制试剂

试剂名称 各组分浓度或配方

TES溶液 10mM的Tris-HCl

10mM的EDTA

0。5%的SDS

DEPC 水 终浓度为0。1％的DEPC

75%的乙醇 75mL无水乙醇

25ml灭菌过的DEPC水

10×FA Buffer 6。8g NaAC·3H2O

400mL DEPC 处理过的去离子水

20。9g MOPs

1。86g EDTA二水二钠

NaOH调pH至7。0

DEPC 处理过的去离子水定容至500mL

5×甲醛变性胶加样缓液 4。0mL 10 x FA buffer

3。84mL 甲酰胺

2。0mL 100%的甘油

720µL 37％的甲醛

80µL 0。5M的 EDTA

16µL水饱和的溴酚蓝

100µL DEPC水

1×TAE 5。5g/L Tris-Cl

2。75g/L 硼酸

1mol/L EDTA

 

2。4 使用仪器

本实验使用的仪器见表3。

 

表3 本实验中使用的仪器

仪器 生产公司 型号

移液器 Eppendorf P-2, P-20, P-200, P-1000

高速冷冻离心机 APECE1株在鸡血中RNA的提取(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_200364.html