摘要：地球上分布最广、存储量最丰富的可再生资源之一是纤维素，而纤维素酶能降解纤维素的β-1, 4-葡萄糖苷键以生成葡萄糖或其他可溶性糖，可以作为新一代的可再生能源来源。研究表明，里氏木霉(Trichoderma reesei)所分泌的纤维素酶具有相对产酶量高、稳定性好、适应性较强等优点，是目前应用最为广泛的纤维素酶。文章叙述了利用农杆菌介导法将Bgl3a基因转入里氏木霉基因组，以提高纤维素酶产量。94851

毕业论文关键词：里氏木霉；纤维素酶；农杆菌；转化

Abstract：As one of the most widespread and abundant renewable resources, cellulase can hydrolyze β-1,4-glousidic linkages in cellulose into glucose or other soluble sugar, which can be regarded as the new generation of renewable energy source。 It has been proved that the cellulose produced by Trichoderma reesei is comparely better than others and it can be used in so many different fields。 This article follow describes the methods of introducing DNA into filamentous fungi to increase the production of cellulase。   

Key words: Trichoderma reesei; β-1, 4-glucosidase; agrobacterium; transformation

目录

1。前言 1

2。里氏木霉产纤维素酶的研究1

2。1里氏木霉 1

2。2纤维素酶复合体的组成及功能 1

2。3β-葡萄糖苷酶Bgl3a  2

2。4β-葡萄糖苷酶Bgl3a的克隆 2

3。 材料与方法2

3。1 菌株与质粒 2

3。2培养基3

4。转化机理3

5。实验过程4

5。1 T。reesei 转化受体的制备 4

5。2农杆菌的制备4

5。3里氏木霉和农杆菌共培养 5

6。 PCR鉴定5

6。1 PCR扩增的原理5

6。2 PCR鉴定的结果 6

结论 8

参考文献9

致谢 10

1。 前言 源C于H优J尔W论R文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ752-018766

随着现代工业的不断发展，人们对于能源的需求日趋增加。但随着化石能源的枯竭，寻找廉价，易于获得且不污染环境的新能源逐渐成为各国研究的主要方向。生物质能源不同于传统化石能源，生物质能源属于可再生能源。全球每年由植物体生成总量达1500亿吨的干物质，其中纤维素及半纤维素约占其中一半[1]，纤维素是由D-葡萄糖分子以β-1，4糖苷键组成的大分子多糖。因为纤维素的结构较简单、全球总产量巨大且可由生物降解的特点，所以如果能通过生物转化技术将地球上的纤维素和半纤维素降解成单糖，对于缓解世界范围内的能源危机及固体废弃物得资源化具有难以估量的价值。纤维素酶在转化纤维素和半纤维素方面具有决定性的作用。自然界中能生产纤维素酶的微生物种类很多，但是大多数由于产纤维素酶能力低且酶系组分不完全，限制了其在工业上的应用。其中，里氏木霉由于产量高及其产物安全无毒成为主要的纤维素酶生产菌株之一。从20世纪90年代初，国内外就开始研究如何利用里氏木霉产纤维素酶，并对产酶的工艺条件开始进行摸索。近年来，人类通过诱变选育、基因工程、原生质体融合等菌种选育方法，在纤维素酶的生产方面取得了较为突出的进展[2]。

2。里氏木霉产纤维素酶的研究

2。1里氏木霉

早在1906 年纤维素酶从蜗牛消化液中被分离出来后，全球就开始了对纤维素酶的广泛研究。纤维素酶的来源非常广泛，可由譬如昆虫、细菌、放线菌、真菌、动物等体内。直到20 世纪50 年代初，REESE 和MANDEL发现里氏木霉(Trichoderma reesei)所产的纤维素酶体系效果好，具有商业化应用的可能性[3]。里氏木霉是一种好氧的丝状真菌，为多细胞真核微生物，其分泌的纤维素酶是胞外酶，经初提和分离纯化就可得到纤维素酶制剂。由于里氏木霉产纤维素酶量高、稳定性好、适应性强、且可以通过物理和化学诱变获取高产菌株，便于生产和管理，因此研究和利用价值突出[12]。 农杆菌介导转化bgl3a到里氏木霉RutC-30及其鉴定:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_202965.html