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苦苣菜黄网病毒P蛋白单克隆抗体的制备(2)

时间:2020-03-20 21:28来源:毕业论文
植物病毒粒子的形态归纳为三类:棒状(包括线状)病毒、球状病毒、杆状(包括弹状)病毒[1]。弹状病毒科(Rhabdoviridae)的病毒粒子,其形态似棒状或

植物病毒粒子的形态归纳为三类:棒状(包括线状)病毒、球状病毒、杆状(包括弹状)病毒[1]。弹状病毒科(Rhabdoviridae)的病毒粒子,其形态似棒状或子弹状,大小为(130~380)×70纳米,核心是螺旋对称的核壳,内含单股负链RNA。核壳外层具脂蛋白包膜,膜上有突起的糖蛋白。病毒在细胞质内增殖,以芽生方式释放。弹状病毒科(Rhabdoviridae)是一个庞大的科,分为6个属。其成员都为单分体负链病毒,寄主范围广泛,可分别侵染哺乳动物、鱼类、昆虫和植物。其中侵染植物的成员归为植物弹状病毒组,它们的颗粒呈棒状或子弹状,以棒状为主[2],其中有些植物弹状病毒还有着其独特的折叠杆状。

根据植物弹状病毒的复制位点是在细胞质或细胞核中,可以分为细胞质弹状病毒(Cytorhabdovirus)和细胞核弹状病毒(Nucleorhabdovirus)两大类。在自然界中,大多数植物弹状病毒主要依靠食植性昆虫传播,他们的分布受到生态环境和宿主的偏好的影响。某些植物弹状病毒可以通过人工摩擦接种传播,但未见报道植物弹状病毒能通过种子和花粉传播。现已知有能侵染许多单子叶和双子叶植物的弹状病毒[5],如苦苣菜黄网病毒(Sonchus yellow net virus, SYNV) 、水稻黄矮病毒(Rice yellow stunt virus, RYSV)、茄斑驳矮化病毒(Eggplant mottled dwarf virus, EMDV)、莴苣坏死黄化病毒(Lettuce necrotic yellow virus, LNYV)、大麦黄条花叶病毒(Barley yellow striate mosaic virus, BYSMV)、玉米花叶病毒(Maize mosaic virus, MMV)、马铃薯黄矮病毒(Potato yellow dwarf virus, PYDV)、草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus, SCV)、芋头镶脉病毒(Taro vein chlorosis virus,TAVCV)等50多种。这类病毒引起大量农业上的严重病害,造成重大经济损失。

1.1.1 病毒粒子的形态和组成

电子显微镜下,我们可以观察到各种形态的弹状病毒粒子,这是因为弹状病毒的病毒粒子是及其容易扭曲、变形的。但经过染色和固定处理之后,植物弹状病毒通常呈现出杆状的形态。其病毒粒子的大小通常也有很大差异,宽约为45~100nm,长约为130~350nm。大多数的病毒粒子包含了三个电子密度不同的层,5~10nm的由糖蛋白(G)组成的尖峰状的表面突起构成了病毒粒子的最外层;中间层是包括被G蛋白穿透的宿主衍生的脂质膜;膜中包围了条纹状的内芯,每隔4~5nm是由一个螺旋形的含有基因组RNA的核糖核蛋白。使用温和的清洁剂能够解离出病毒粒子最内层的螺旋结构的核心,可以得到N、P蛋白和聚合酶蛋白L。除此之外,病毒粒子还包括基质蛋白M和G蛋白,以及细胞间的运动所需要的另一种蛋白。

1.1.2 基因组结构和组成

弹状病毒拥有的共同的基因结构为(3'-ℓ-N,P,M,G,L-5'),在测序的所有病毒中发现P基因和M基因之间还包含位置X。然而,SCV和RYSV的G和L的基因之间还有位置Y的基因存在。LNYV的基因结构顺序是3'-ℓ-N-4a-4b-M-G-L-t-5'。其中,4a被认为是磷蛋白,4b可能对应于SYNV的sc4。MMV和TaVCV其中还有一个特有的基因。MFSV在位置X包含基因3和基因4。RYSV和SCV都拥有位于位置X的基因3,和位于位置Y的基因6 [13]。基因复杂度最高的植物弹状病毒则是NCMV,有四个位于P和M基因的小基因[14]。由于SYNV、LNYV、RYSV和SCV具有相同的基因顺序,这些额外基因数量和位置似乎已经超出了细胞核弹状病毒属和细胞质弹状病毒属的范围。这些病毒的编码区域的3'末端和5'末端分别连接着84~206(前导)和145~389(拖尾)个核苷酸的非编码的序列,这些序列相比VSV的要长得多,和其它的弹状病毒很少有共同序列,但与其它负链RNA病毒一样拥有很短的末端补充序列。相比动物弹状病毒,SYNV转录的前导RNA是多聚腺苷酸化,而动物弹状病毒的并不是多聚腺苷酸化的[3]。此特征或许是对环境的适应用以促进核模式复制。 苦苣菜黄网病毒P蛋白单克隆抗体的制备(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_48600.html

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