2.1 载体的构建

（1）pBIL2 35S GFP载体的构建

用BglⅡ和EcoRⅠ酶切pZA 35S GFP，用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切质粒pBILoxp2，反应体系（100μl）如下：

pBILoxp2      40                         pZA 35S GFP    20

BamHⅠ       2                            BglⅡ        2.5

EcoRⅠ        2                            EcoRⅠ       2.5

EcoRⅠButter  10                        EcoRⅠ Butter   10

BSA           1                            BSA           1

H2O           45                            H2O          64

在37℃温浴3小时，用PCR产物纯化试剂盒进行纯化，最后用22μl的去离子水洗脱，加入2.5μl的T4 DNA连接酶buffer和0.5μl T4 DNA连接酶，22℃连接2～3小时，