对于工作电极来说，能够保证实验的重现性很重要，所以要进行电极的预处理。对于金电极来说它的预处理方法通常有物理方法、化学方法和电化学方法。

物理方法有机械打磨和超声波清洗，机械打磨首先使用粒径为0。3微米的氧化铝悬浊液在麂皮上打磨一定时间，再使用粒径为0。05微米的氧化铝悬浊液打磨，这样做的目的就是可以在一定程度上除去电极表面上吸附的杂质；超声波清洗主要是将电极放置于超纯水和无水乙醇等溶液中，进行超声，这样可以去除通过静电作用吸附在电极表面的杂质。化学方法主要是将电极放置于水虎鱼酸等强氧化剂溶液中，氧化除去电极表面的杂质。电化学方法是电极在稀硫酸等缓冲液中，采用循环伏安法、脉冲电位法除去电极表面的杂质[18-19]。

对于构建传感器来说，将探针固定在金电极表面是电化学生物传感器构建中是很关键的环节。到目前为止常用的一些固定化的方法有自组装[20-25]、配位化学[26-28]、静电吸附[29-35]、共价键合[36-40]等。

 在此实验中，金电极可以与巯基形成Au-S键，因此将巯基修饰到适配体末端后，便可以利用此性质将适配体修饰到电极表面来构建特殊的结构模型[41]。图1。1电化学传感器原理图。

1电化学传感器原理示意图

1。4  核酸适配体 

    适配体（Aptamer）是采用指数富集的配体进化技术（SELEX）从特定的寡核苷酸库中筛选出来的可以与靶分子发生特异性结合的寡核苷酸，适配体包括DNA和RNA。SELEX技术就是将大量的靶分子与寡核苷酸进行相互作用，继而可以从中筛选出可以与靶分子发生特异性结合的寡核苷酸，然后再进行体外PCR扩增技术进行富集，上述步骤循环数次最终便成为高特异性、高亲和力的核酸适配体[42-43]。适配体在食品安全分析[44]、药物研发[45]等领域有着很大的发展潜力。

    寡核苷酸可以形成特殊的G-四聚体结构、发夹结构、茎-环结构等（图1。2）利用此结构可以筛选出可以特异性识别某些分子，从而筛选出我们所需要的适配体，用其来进行分子的检测。

随着该项技术的不断发展，很多的靶分子已经获得了它们相应的具有很高的性和高亲和力的适配体。与抗体相比，适体具有更高的特异性和亲和性，并且适体的制备更加简便快捷，可以在体外快速的获得大量的适配体。相比较与抗体，适配体更加稳定，便于储存。另外，适配体虽然可以弥补抗体在某些程度上的不足，但是适配体并不能完全的取代抗体。

图1。2 各种稳定的适体结构

1。5  点击化学

   点击化学(Click chemistry)，又称为"速配接合组合式化学"、"链接化学"、"动态组合化学" (Dynamic Combinatorial Chemistry)，是由化学家K B Sharpless引入的一个概念。点击化学是将一些小分子拼接起来，从而可以快速的合成大量的化合物，因为形似点击鼠标所以称为Click chemistry。它尤其强调的是C-X-C键的合成，我们利用这一反应就可以快速地获得大量的多样性分子。点击化学反应主要有4 种类型:亲核开环反应、碳碳多键加成反应、环加成反应、非醇醛的羰基化学。点击化学的代表反应为Cu+催化的叠氮基与炔基的环加成反应(Copper-Catalyzed Azide–Alkyne Cycloaddition)。有些叠氮化合物是1，3-偶极体可发生环化加成反应[46-47]。在本次实验中采用乙炔基二茂铁与叠氮基的反应（图1。3）。

 乙炔基二茂铁与叠氮基的反应示意图

1。6  电化学表征

1。6。1  循环伏安法 凝血酶的快速电化学生物传感分析(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_84062.html