1。2。8菌丝形态鉴定 4

1。2。9菌种DNA提取 5

2 结果与分析 5

2。1植物内生真菌分离结果 5

2。2 MTT结果 6

2。3 菌落形态观察 6

2。4电泳图 7

2。5 DNA测序 8

3 讨论 9

致 谢 10

参考文献 11

引言

植物内生真菌是能与健康的植物组织共存，但对植物不会发生较为显著的病态伤害作用的真菌。内生真菌可以寄生在众多植物组织中，基本涵盖藻类、草本类、灌木类、和针叶类等，范围十分广泛，所有自然界的植物中都分布着内生真菌[1]。论文网

从获取的技术层面看，内生真菌的来源十分广范、种类也非常繁多，所以人们可以用传统的人工组织分离法来进行操作，这样非常简便、成本相对而言也非常低。内生真菌一般分布的范围包括它的根茎叶和各个不同组织部分。植物内生真菌拥有产孢子的有性繁殖和不产孢子的无性繁殖这两种不同传代方式。根据研究数据表明，药物植物的内生真菌能生产非常近似的代谢产物(如紫杉醇)[2]；并且因为真菌与植物间可以做到长久互相作用和配合进化，以是随之产生的代谢产品极度丰富，此外也有研究表明，从内生真菌中所分离到的活性物质里有50%以上都是新化合物[3]。由内生真菌合成而得到的生物碱、黄酮、萜类、甾体等化合物对人类有着重要的意义，因为它们也有抗癌、抗菌、抗氧化、生物防治等效果。就目前为止，在人们关于天然产物的研究中，研究较多的还是植物，导致很多植物有些被过度使用，而现在根据内生真菌的不断开发，不仅可以缓解资源过度使用问题，更对新型天然产物的获得产生了不可磨灭的重大意义[4]。                 

但是，由于植物内生真菌的种类受很多因素影响，所以并不能肯定从同一种植物中是否能分离得到新菌株，所以本实验分别从徐州和扬州两个地方采摘不同样本，希望能提升获得代谢出活性物质的内生真菌的概率。而本课题所采取的样本均来自日常生活中的普通植物，如香樟，冬青，桑叶，柳树叶，茶花叶等，采用取样，表面灭菌 ，平板接种及室温培养 ，菌种纯化，菌种保藏 ，菌种发酵，过滤发酵液，MTT法检测内生真菌代谢产物的抗肿瘤活性，最后再进行菌丝形态鉴定 ，菌种DNA的提取 ，最后确定菌种。虽然是我们日常生活中非常普通的植物，但也有一定的研究价值。 

1 材料与方法

1。1材料

1。1。1分离材料

香樟，冬青，茶花叶，柳树叶，桑叶等来自扬州。取这些植物的根茎叶。取材时，同一种植物在两个不同植株上分别取三部分，并且要在不同部位。

1。1。2 培养基

   PDA培养基：将从外面买的新鲜的马铃薯先洗干净，用刀去皮，再用电子称称取200g，削去外皮切成块状，在锅中加入略少些的水，将马铃薯放入，煮约25min，到能被戳动但不融化就可以了。

再用干净且干燥的纱布进行过滤，液体进入量筒中，加进20g称好的葡萄糖，滤液补充水分至1000ml，再将滤液倒入锅中，放入提前称好，并已弄碎的20g的琼脂，加热，直至琼脂完全溶解，补充水至1000ml。文献综述 桂花内生真菌的分离纯化鉴定及其抗肿瘤活性研究(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_87738.html