第一个挖掘并克隆的菌根诱导的磷转运蛋白是马铃薯StPT3[23]，随后在水稻[24]、苜宿[25]、番茄[26]、大麦[27]、小麦[27]等植物中相继克隆了菌根诱导/特异的多个磷转运蛋白基因。目前，小麦鉴定中菌根诱导的特异的小麦磷转运蛋白有TaPTmyc[27]、TaPT10[28]、TaPT11[28]、TaPT12[28]等，但并未对其进行转基因植株的功能验证，这些基因在植物中的具体功能并不十分清楚，还有待进一步研究。

本试验前期工作中，对获得的小麦Pht1基因家族进行两种菌根和低磷条件处理分析，获得了多个菌根诱导的磷转运蛋白，将其中一个基因在NCBI中比对得知该基因是一个新的未经报道的磷转运蛋白，将其命名为TaPT16。因此本研究拟对TaPT16基因进行病原菌及几丁质的接种分析，同时克隆TaPT16全长，并构建超表达载体，将其转化磷利用低效的京411小麦，为该基因的功能研究奠定基础。本研究可能对进一步揭示小麦与丛枝菌根的共生机制，以及丛枝菌根促进磷的吸收与转运提供理论依据，为小麦磷高效利用的分子育种提供基因资源。

1.材料与方法

1.1实验材料与仪器

1.1.1实验材料

小麦品种周麦26、京411；AM真菌-摩西球囊霉(Glomus mosseae)和地表球囊霉(Glomus versiforme)、腐生真菌-禾顶囊壳小麦变种和麦根腐平脐蠕孢均由周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供。

1.1.2实验仪器

 实验中所用主要仪器以及生产公司和型号如下：电热恒温水槽，生产公司为上海精宏实验设备有限；温度梯度PCR 仪，生产公司为Biometra 公司；以及Eppendorf Centrifage5424的 高速离心机，上海智城 ZHWY-1102C型恒温摇床，Tanon 2500 琼脂糖凝胶成像系统，BIO-RAD CFX96TM Real-time System等主要实验仪器。

1.1.3实验药品及试剂

试验所需主要药品及生产公司如下：大肠杆菌感受态E.coli DH5α、农杆菌感受态GV3101 为北京全式金公司生产，cDNA 合成试剂盒、SYBR○R Premix Ex TaqTM II （Tli RNaseH Plus）为宝生物工程（大连）有限公司生产，高纯度质粒小量快速提取试剂盒和DNA胶回收试剂盒为北京艾德莱生物技术有限公司生产，Trizol 为上海拜力生物科技有限公司生产，Gateway pDONRTM201 Vector、BP ClonaseTMⅡ Enzyme Mix、LR ClonaseTMEnzyme Mix均为美国 Invitrogen 公司生产。

1.2材料培养和处理

本试验供试小麦品种为周麦26，将小麦种子置于放有吸水纸的培养皿上，加入适量蒸馏水，4℃春化处理1周，然后将其放入25℃恒温光照培养箱中，生长至三叶期。

1.2.1菌根及低磷处理

将三叶期小麦移植到分别加摩西球囊霉(Glomus mosseae)和地表球囊霉(Glomus versiforme)两种菌根的细沙、蛭石与珍珠岩1：1：1比例混合的培养基质中，菌根接种量为200 个孢子/15g。在光周期为16h/8h，温度为18℃/15℃的光照培养箱中生长，每3天浇一次营养液，6周后取小麦根部，清水洗净，收获根部样本，-80℃保存备用。 

表1实验处理

名称 备注

+P-M 不接种菌根，磷浓度为500μmol/L的MS营养液

-P-M 不接种菌根，磷浓度为5μmol/L的MS营养液

+P+GM 接种GM菌根，磷浓度为500μmol/L的MS营养液

-P+GM 接种GM菌根，磷浓度为5μmol/L的MS营养液

+P+GV 接种GV菌根，磷浓度为500μmol/L的MS营养液

-P+GV 接种GV菌根，磷浓度为5μmol/L的MS营养液

1.2.2几丁质处理 丛枝菌根诱导的小麦磷转运蛋白基因TaPT16的研究(3):http://www.youerw.com/shuxue/lunwen_204756.html