2。4。2。1 原理

DPPH，化学命名为 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，别名 1,1-二苯基-2-苦肼基，分子式 为（C6H5）2N-NC6H2(NO2)3，为暗紫色棱柱状结晶体，熔点 127~129℃(分解)，是一种很稳定 的氮中心的自由基，可以轻松地“清除”其他的自由基。因此通过观察加入 DPPH 自由基 后化学反应速率是否变慢来判断这一反应是否是自由基反应。另一方面，由于在波长 515nm 处，DPPH 有强烈的吸收作用且在溶液中呈现深紫色，此外，于反应物反应后会褪色为浅黄

色或者无色。为了更加直观地检测反应过程，可通过上述特点进行操作。DPPH 的初始自由 基的量也可根据其在 515nm 处的吸光度值进行推导得到。

2。4。2。2 溶液的配置论文网

Tris-HCl 缓冲溶液（pH=8。2）：取 6。25gTris 试剂于蒸馏水中，加浓 HCl 2。00ml， 稀释定容在 250ml 容量瓶中，得到 pH=8。2 的 Tris-HCl 缓冲溶液。

DPPH 溶液：称取 3。0mgDPPH 于 50ml 容量瓶中，以甲醇溶液定容，得到浓度为 1。50× 10-4mol/L DPPH 溶液。

2。4。2。3 DPPH·清除率的测定[8]

用移液管准确移取 1mL 的 DPPH 溶液和 0。45mL 的 Tris-HCl 缓冲溶液于 10mL 容量瓶中， 随后加入 8。55mL 的甲醇，定容至 10 毫升。将容量瓶放于暗处反应 0。5h，以甲醇为参比溶 液，在紫外可见分光光度计下，将最大吸收波长调为 515nm，平行测定三次，测得吸光度 为 A0。

用移液管准确移取 1mL 的 DPPH 溶液和 0。45mL 的 Tris-HCl 缓冲溶液于 10mL 容量瓶中， 在分别加入 2。5mL、3。0mL、3。5mL、4。0mL、4。5mL 的麦冬果实蓝色素溶液于容量瓶中，最 后分别以甲醇定容至 10mL。将五份样品溶液放置于暗处反应 0。5h，以不加乙醇提取液的 溶液作为参比溶液，在紫外可见分光光度计下，将最大吸收波长调为 515nm，平行测定三 次，测得吸光度分别为 A1、A2、A3、A4、A5。

各个样品溶液的 DPPH 自由基清除率计算公式为：

清除率（%）=（A0－A）/A0×100%

2。4。3·OH 清除率的测定

2。4。3。1 原理

本反应利用 30％H2O2 和 FeSO4 混合产生羟基自由基。通过全波长扫描可以发现，溶液 在 510nm 处最大吸收峰消失。因此可以在 510nm 处测定其吸光度，通过吸光度的变化能直 观地反映出抗氧化剂自由基的能力。

2。4。3。2 溶液的配置

0。10mol/L 氢氧化钠溶液：称取 0。2g 氢氧化钠，加蒸馏水充分溶解并定容至 50ml 的 容量瓶中。

磷酸缓冲溶液 PBS（pH=7。4）：称取磷酸二氢钾 0。68g，加入浓度为 0。10mol/L 氢氧 化钠溶液 39。5ml，用蒸馏水稀释至 100ml 的容量瓶中，即得到 pH=7。4 的磷酸缓冲溶液。 邻二氮菲溶液（5。00×10-3mol/L）：称取 0。0990g 邻二氮菲，加 95%乙醇溶液溶解并

定容至 100ml 的容量瓶中。FeSO4 溶液（7。50×10

容至 100ml 的容量瓶中。

mol/L）：称取 0。2086gFeSO4·7H2O，加入蒸馏水充分溶液并定文献综述

H2O2（0。1%）：用移液管准确量取 0。33ml 浓度 30%H2O2，加入蒸馏水稀释至 100ml 容量 瓶中即得到 0。1%的双氧水溶液。

2。4。3。3·OH 清除率的测定反应体系分为 3 种，分别为空白管、损伤管和为损伤管。三种反应体系的加料如下表

1 所示。PBS（ml） H2O2（ml） H2O（ml）

损伤管的加料如下：用移液管分别移取 1mL、1。5mL、2mL、2。5mL、3mL 麦冬果实蓝色 素溶液于 10mL 具塞管中并加上上述表格中各试剂，最后以蒸馏水定容。待反应半个小时 后在波长 510nm 处测定吸光度。通过样品在 510nm 处的吸光度可计算得出羟自由基的清除 率，公式为：