荧光分析法相对于质谱法、极谱法所用到的设备较为简单且造价便宜，它同时具有分析灵敏度高、选择性强和使用简单的优势。荧光法本文采用的是荧光产生剂荧光素FL直接与自由基产生剂AAPH反应，测定荧光强度的变化，并加入不同浓度抗氧化剂观察其线性关系，对比不同浓度精油的抗氧化性能的强弱。

分光光度计法本文涉及到了DPPH自由基清除法和羟基自由基清除法[13]。

DPPH自由基清除法：

DPPH在510nm处有最大吸光度A0，当加入抗氧剂后它在510nm处的吸光度会随着DPPH自由基被清除而减弱吸光度为At，DPPH是一种相对稳定的自由基，它为清除自由基活性的测试提供了一个理想且简单的操作模型。

羟基自由基清除法：

清除率=[1-( Ax+Ax0)/A0]x100%

Fenton反应[14]是羟自由基的产生的来源，由Fenton反应生成的羟自由基与水杨酸反应，生成在510nm有较强吸收光的2,3-二羟基苯甲酸，同DPPH一样加入实验采用的抗氧化剂清除体系中的羟基自由基使有色物质减少。

1。1。8 比重的测定

根据AOAC（2000）标准方法[15]测定蓝桉油的比重。简单的说就是，比重瓶的重量是（W0），然后装满水并插入塞子。 除去瓶中的水之后并再次称重（W1）。 用油样品重复想通过程重新称重得到（W2）。 使用下面公式计算油的比重：

油的比重=(We-W0)/(W1-We)

其中W0 =空比重瓶的重量，W1 =水的重量+比重瓶的重量，W2 =油的重量+比重瓶的重量[16]。

1。2 选题意义

目前市场上对精油的需求量呈直线上升，精油的功能逐步被开发利用，天然产物相较于合成产物更受市场的青睐，柚子皮精油具有止痛镇痛缓解疲劳忧郁等多种功效，但目前柚子皮精油在市面上没有可以大规模产业化提取的高效方法。本实验的研究目的在于测定柚子皮精油的最优化提取方案，研究其所含物质并结合精油的组成性质，以及不同测定方法的差异，比较分析柚子皮精油的抗氧化性能，为今后的柚子皮精油功效的开发利用奠定实验基础[17]。

1。3 实验方案

通过采用优化的水蒸气提取条件，如较佳的样品处理、提取液料比、温度、时间等，提取柚子皮精油。

分别采用荧光法和分光光度法测定所得精油产品的抗氧化性能，比较研究不同方法测定精油抗氧化效果的差异。

 结合精油组分分析，以及不同方法测定精油的抗氧化结果，初步研究分析产品的结构和抗氧化性能之间的关系、以及测定方法之间的差异等。

2 实验仪器与设备

2。1 实验试剂文献综述

实验中所用到的试剂，如表1所示：

表1 主要实验试剂

名称 纯度 生产厂家

氢氧化钠二甲亚砜AAPHFL荧光素无水乙醇DPPHVe邻苯三酚HClTris-HCl硫酸亚铁过氧化氢

水杨酸 A。R。 国药集团

2。2 实验设备本实验所用仪器设备见表2：

表2 主要实验设备名称 型号 生产厂家

气相色谱仪

紫外、可见分光光度计高速冷冻离心机

超声波清洗器气相色谱质谱联用仪

电子天平非极性毛细管柱 GC9160

HP-5MS 上海华爱色谱分析技术有限公司

上海精密科学仪器有限公司

英国百夫长科技有限公司

上海科导超声仪器有限公司