2。2。5 质谱检测 8

2。2。6数据统计分析 9

2。2。7生物信息学分析 9

3 实验结果与分析 9

3。1差异蛋白的筛选 9

3。2 差异蛋白的GO分析 14

3。3 差异蛋白的PPI相互作用网络图 16

4讨论与结论 17

参考文献 19

致谢 20

 1引言

鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma, NPC)是病发于鼻咽部常见的恶性肿瘤之一[1-2]。2002年，全世界报道新增病历64789例中80%以上发生在中国。以我国南方为例，鼻咽癌发病率高达25-30/10万人年[3-4]。鼻咽癌的发生发展可能涉及多种因素，如EB病毒的感染、遗传因素、饮食习惯及环境因素等。鼻咽癌多发生于鼻咽部的咽隐窝和顶后壁,解剖位置比较棘手, 不适合手术治疗，临床表现复杂且不典型,容易造成漏诊、误诊。目前在临床上鼻咽癌治疗主要是化疗和放疗相结合，预后评估往往不理想，许多鼻咽癌患者确诊时已属晚期。因此，探索鼻咽癌细胞生长规律，研究诱导鼻咽癌细胞凋亡途径与机制，寻找和研究鼻咽癌特异性强、敏感性高的标志分子作为鼻咽癌早期诊断及预后评估显得尤为重要。来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766

一氧化氮(nitric oxide, NO) 是一种具有亲脂性的小分子[5-6]，微溶于水，能自由通过生物膜，大量研究[7-10]发现NO通过作用靶细胞参与一系列生理和病理条件下的生物过程，如血管扩张、血管通透性、神经信号传递、免疫防御反应等起到生物多功能信号分子的作用。自Hibbs首次发现活化巨噬细胞所产生的NO具有毒性效应，能够抑制肿瘤细胞增值甚至对肿瘤细胞起杀伤作用，大量的研究表明NO在肿瘤细胞的相关过程如肿瘤的发生、发展、侵袭和转移中能够诱导肿瘤细胞凋亡[11]。桑建荣等[12]用NO供体SNP处理胃癌SGC-7901细胞，发现SNP使细胞周期发生变化，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。易翔[13]等用外源性NO供体S-亚硝基-N-乙酰基-DL-青霉胺(S-nitroso-N-acetylpenicillamine,SNAP)对TWO3细胞和CNE2细胞进行处理，发现高浓度的NO对TWO3及CNE2生长起抑制作用。姜辉等[14]用NO供体硝酸甘油处理人宫颈癌细胞Hela时，发现细胞生长情况改变，表现为形态出现分离、皱缩，且密度下降，部分细胞发生凋亡。聂晶[15]等人对体外传代培养的CNE细胞加入0。01～10μmol。L-1一氧化氮供体DNP作用48小时，噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室法、硝酸酶法和RT-PCR等方法进行实验，结果发现DNP对CNE细胞的增殖和迁移均有不同程度的抑制影响(P<0。05)， 他们认为DNP可能对CNE细胞的增殖和迁移起抑制作用。刘智勇等[16]利用不同浓度的SNP（NO供体）处理人肝癌细胞HepG2细胞12 h,发现p-ERK1/2的表达水平出现上调，部分HepG2细胞的凋亡。课题组前期研究表明，一定浓度的NO供体巯基亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖起抑制作用[17]。本文采用iTRAQ标记结合LC-MS/MS技术寻找鉴定GSNO作用CNE-2细胞后的差异表达蛋白，试图从整体蛋白水平研究抑制鼻咽癌细胞增殖的机制，寻找鼻咽癌细胞有效的药物靶点。论文网

2材料与方法

2。1 实验材料及仪器

2。1。1 细胞株

CNE-2细胞株系由浙江医院馈赠。

2。1。2 实验试剂

还原性谷胱甘肽（GSH）购自上海晶纯生化科技股份有限公司；二甲基亚砜( DMSO) 购自美国Sigma公司；Hepes购自Solarbio科技有限公司；iTRAQ标记试剂-8 plex sciex购自AB公司；抗HSP90单抗购自RabMAb公司；Bradford蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；Urea、SDS、Tris、DTT、IAA购自BioRad公司；0。22um超滤管购自Corning公司；10KDa超滤管购自Sartorius公司。