目前处理废水的常用手段之一是生物处理[5]。生物处理的核心元素是微生物,微生物群落结构的多样性、稳定性和种群恢复性能是保障处理系统有效性的关键因素[6-7] 。而传统的显微镜法、分离技术法不能全面准确地描述微生物群落结构的组成,荧光抗体染色法、电子显微镜法虽然能观察微生物的生物形态,但也不足以描述微生物群落结构的动态变化。PCR-DGGE克服了传统微生物群落种群结构分析技术步骤繁琐、工作量大,难以模拟微生物生长繁殖的真实环境等局限性,从分子生物学的角度,揭示生物群落多样性和动态变化,具有可靠、方便快捷、重现性好等优点,而被广泛运用,比较全面、深入、客观和精细地描述了活性污泥中微生物群落结构特征[8]。
PCR-DGGE是基于16S rRNA(rDNA)基因的一种分子生物学分析方法。变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)最早是Lerman等人在20世纪80年代初期设计来检测DNA片段中的点突变的一种方法[9]。1993年,Myers首次将变性梯度凝胶电泳技术用于环境微生物群落结构的研究,对微生物种群多样性、种群比例以及系统进化信息进行分析。从此,该技术及其衍生技术被广泛应用于微生物分子生态学研究的各个领域,主要包括土壌[10]、海洋[11]、湖泊[12]等,在21世纪初期,成为了研究环境微生物群落结构的主要检测工具。
在活性污泥的系统中操作如下:提取活性污泥中微生物群落的基因组 DNA,选择合适的引物对微生物的16SrDNA基因进行PCR扩增,然后对PCR产物采用变性梯度凝胶电泳进行分离,最后通过基因文库进行序列分析从而鉴定得出微生物群落多样性信息。文献综述
本研究以氟化工废水为研究对象,采用了PCR-DGGE及克隆技术进行试验操作,根据DGGE指纹图谱,分析污泥中的微生物群落结构,菌种属性,以及菌种多样性;通过克隆测序,从三种泥样中,鉴定微生物的16S rDNA序列,筛选能够适应和降解氟化工废水的优势菌种。
2材料与方法(Material and Method)
2。1废水及材料来源
试验所用的氟化工废水取自浙江某大型氟化工厂污水处理厂,三种污泥分别取自该氟化工污水处理厂一期工程活性污泥S1,二期工程活性污泥S2,以及城市污水处理厂的活性污泥S3;污泥均为二沉池回流污泥。