2 材料和方法

2。1 材料

2。1。1 菌种

枯草芽孢杆菌 BS10，由实验室提供。

2。1。2 仪器

培养皿、试管、移液枪、接种环高压灭菌锅、电磁炉、摇床、混匀振荡器、 紫外线超净台等

2。1。3 培养基论文网

PDA 培养基配置 配制方法

成分：马铃薯（去皮）：200 克；葡萄糖：20 克；琼脂：15-20 克；自来水： 1000 毫升；PH：自然 pH。配制步骤：煮马铃薯块： 继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄 糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至 1000 毫升，分装于锥形瓶中，加塞、包 扎，(121℃)灭菌 20 分钟左右后取出锥形瓶进行摇匀，放置待冷却后贮存备用。称量和熬煮按培养基配方先将土豆洗净去皮,准确称取 200g 马铃薯，然后切成小块，放 入平底锅中，再量取 1000ml 自来水，加入锅内煮煮沸，时间大约为 20-30 分钟， 待马铃薯能被玻璃棒戳破即可。然后关火冷却 20 分钟，用纱布过滤（纱布的层 数根据纱布的密致程度适当增减），将煮沸的马铃薯汁液挤入量筒中，滤渣弃取。 最后将滤液加水补充到 1000ml。

溶解琼脂

将马铃薯汁液倒入锥形瓶中，然后再称取葡萄糖 20g 加入锥形瓶中，在称取 琼脂粉 12g（此处用琼脂条代替），并用玻棒不断搅拌，使琼脂条尽量溶解一部 分，待琼脂溶解一部分后，再补充水分至所需量。

2。2 实验方法

2。2。1 分装

将配制好的的培养基分装入两个 500ml 的锥形瓶内。分装时可用三角漏斗以 免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

2。2。2 包扎

将分装好的培养基进行密封处理。用封口膜将锥形瓶的瓶口扎起来，用橡皮 筋捆好，检查确定密封完好。在锥形瓶上贴上标签，用记号笔注明培养基名称、 组别、配制日期。小心的放入灭菌锅内，调试高压蒸汽压力为 100Pa，灭菌时间 为 20min。

2。2。3 灭平板

同时将需要灭菌的平板用报纸包好，和培养液一起在高压灭菌锅中进行灭 菌。

待高压灭菌锅的温度下降到 65 摄氏度左右，配戴手套打开高压灭菌锅的把手，轻轻的拿出已经灭菌好的培养液和平板（报纸被水蒸气打湿，防止被撕破， 新的细菌进入培养液）静止待温度降下来。

打开通风橱进行紫外灭菌 25 分钟，等待灭菌结束后倒平板。倒平板过程一 定要保持无菌环境。

2。2。4 接种

将保存在冰箱里的菌液 BS-10 取出，放入通风橱中待接种。点燃酒精灯倒平 板，倒好之后将平板进行倒置，等待其凝固。15 分钟以后开始接种。先点燃酒 精灯，将接种环进行灼烧，灭菌。然后事先准备好的菌液 BS-10 用接种环挑取， 接种到培养基上。接种完成后放置在 28ºC 下的恒温培养箱中进行活化培养 24h。文献综述

2。2。5 活化

将培养 24h 后的菌液 BS-10 进行第一次活化。挑取接种后平板上长出来的单 菌落接种于固体 PDA 培养基中（配置方法同上），完成后放置在 28 ºC 下的恒温 培养箱中进行活化培养 24h。

将培养 24h 后的第一次活化菌液 BS-10 进行第二次活化。挑取第一次活化后 平板上长出来的单菌落接种于固体 PDA 培养基中（配置方法同上），完成后放置 在 28 ºC 下的恒温培养箱中进行活化培养 24h。