酶解法去除黄曲霉毒素的研究(2)
们难免会吃到一些轻微发霉的食品，如何能找到一种温和的适用于人体的补救措施，是本文
的研究目的所在。研究表明乳酸菌对某些真菌生长与产毒有抑制作用，同时对已存在的毒素
亦有吸附作用[4～5]。而酸奶中含有丰富的乳酸菌，其中尤以嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌最为
常见，且民众对酸奶有着普遍较高的认同。因此选择身边最常见的酸奶品牌做菌种分离与鉴
定，增殖培养后选菌浓度最大的时候与AFB1混合振荡培养，考察菌种和酸奶对 AFB1的去除率。
本文探讨了酸奶中的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌对黄曲霉毒素B1的吸附能力，为日常
生活中喝酸奶缓解低量黄曲霉毒素B1提供了数据支持。
2 菌种的分离与鉴定
2.1 实验材料
2.1.1 菌种来源
伊利浓风酸乳（原） ，卫岗风酸牛奶（低脂） ，市购，均含 Str.thermophilus 与 L.
bulgaricus。
2.1.2 实验仪器与设备
MJ-54A 型高压蒸汽灭菌锅，SW-CJ-2FD 型洁净工作台，电子天平，低温培养箱，手持单道
可调移液器，加热磁力搅拌器，显微镜，冰箱，保鲜膜，保鲜袋。
2.1.3 主要试剂
胰蛋白胨，鱼蛋白胨，大豆蛋白胨，牛肉膏，酵母浸膏，抗坏血酸，柠檬三铵，柠檬酸钠，
无水乙酸钠，磷酸氢二钾，七水硫酸镁，七水硫酸锰，七水硫酸亚铁，甘油，吐温 80，乳糖，
葡萄糖，琼脂，氢氧化钠，氯化氢，草酸铵结晶紫，碘液，乙醇，沙黄染液。
2.1.4 培养基配制
嗜热链球菌选择培养基（改良 M17 培养基） ：0.5%胰蛋白胨，0.5%鱼蛋白胨，0.5%牛
肉膏，0.25%酵母浸膏，0.05%抗坏血酸，0.025%七水硫酸镁，1%甘油，0.3%乳糖，0.5%
磷酸氢二钾，1.1%琼脂，蒸馏水 1000mL，pH 6.9±0.2，121℃灭菌 20min
保加利亚乳杆菌选择培养基（改良MRS 培养基） ：1%大豆蛋白胨，0.8%牛肉膏，0.4%
酵母浸膏，2%葡萄糖，0.2%磷酸氢二钾，0.2%柠檬三铵，0.5%无水乙酸钠，0.02%七水硫
酸镁，0.004%七水硫酸锰，1.4%琼脂，0.1%吐温 80，蒸馏水 1000mL，pH 5.4，121℃灭菌
2.2 实验方法
2.2.1 菌种的初培养
将从学校超市采购的伊利牌和卫岗牌酸奶在工作台无菌环境下取样2mL，10 倍梯度稀释
3 次，得到 10
三个稀释度，装入棉花封口的无菌试管，从 10两个稀释度
的试管中按酸奶品牌、稀释度、接种方法、培养条件的不同分别取200µL的稀释酸奶液接种
于S.thermophilushermophilus和L. bulgaricus分离培养基， 剩余稀释酸奶液置于4℃冰箱备用，
平皿置于低温培养箱中 38.5℃培养 48h。观察不同的处理方法对菌种生长的影响，以在培养
基上长出 50～300 个菌落的为最佳。具体操作见表 2.1。
2.2.2 菌种的简略鉴定对照《伯杰氏细菌鉴定手册》肉眼观察各个培养皿中的菌落特征和生长情况并对比记录。
用无菌接种环挑选各个培养皿中有明显特征的菌落进行革兰氏染色，并置于显微镜下观
察菌种的微观形态。
2.2.3 菌种的分离纯化与保藏
选择长势最佳的培养皿，用无菌接种环挑取其中的菌落，采用平板划线分离法分离，每
个培养皿分离三个平行板，置于低温培养箱 38.5℃培养 24h，观察分离效果。培养完成后用
无菌接种环挑选线末单菌， 1/2进行革兰氏染色镜检， 1/2接种于S.thermophilus和L. bulgaricus
试 管 培 养 基 斜 面 进 行 纯 化 培 养 ， 一 共 做 四 种 试 管 斜 面 ， S.thermophilus. 伊 利
（ S.thermophilus.Y ）、 S.thermophilus. 卫 岗 (S.thermophilus.W) 、 L.bulgaricus. 伊 利 （ L.
bulgaricus.Y） 、L. bulgaricus.卫岗（L. bulgaricus.W）,各类取长势最佳的置于4℃冰箱保藏，