摘要：高效的分离原生质体，对于远缘杂交和不亲和的植物实现遗传物质交流和培育新品种有重要意义。本实验以杂交马褂木和拟南芥的叶片为实验材料，探讨了酶解液中添加果胶酶对游离不同蜡质含量植物叶片叶肉原生质体的影响。研究结果表明：对于蜡质含量较低的植物叶片（如拟南芥），以1。5%纤维素酶R-10和0。5%离析酶R-10的酶液组合4h就可以获得大量高活性的叶肉细胞原生质体；对于蜡质含量较高的植物叶片（如杂交马褂木），在1。5%纤维素酶R-10和0。5%离析酶R-10的酶液组合中加入适量的果胶酶Y-23可以显著的提高叶肉细胞原生质体的产量，可为后续原生质体的培养及融合提供高质量的原生质体。92933

毕业论文关键词：杂交马褂木，拟南芥，果胶酶，原生质体

Abstract：Efficient separation of protoplasts, for distant hybrid and non-compatible plants to achieve genetic material exchange and cultivate new varieties of great significance。In this study, we studied the effects of pectinase on the protoplasts of leaves of leaves with different wax content in the leaves of Liriodendron hybrids and Arabidopsis thaliana as experimental materials。The results showed that 1。5% Cellulase R-10 and 0。5% Macerozyme R-10 were combined for 4 h to obtain a large amount of highly active mesophyll cell protoplasts for the plant leaves with low wax content (such as Arabidopsis thaliana)。For the plant leaves with high wax content (such as Liriodendron hybrids),the addition of an appropriate amount of Pectolyase Y-23 in the enzyme combination of 1。5% Cellulase R-10 and 0。5% Macerozyme R-10 can significantly improve the production of mesophyll protoplasts。This can provide high quality protoplasts for the cultivation and fusion of protoplasts。

Keywords: Liriodendron hybrids, Arabidopsis thaliana, Pectolyase Y-23, protoplasts

目   录

1 前言 4

2 材料及仪器 5

2。1 实验材料 5

2。2 仪器与试剂 5

3 实验方法 6

3。1原生质体的分离 6

3。2原生质体的收集与纯化 6

3。3原生质体的产量与活力测定 7

4 实验结果 7

4。1不同植物的原生质体分离效果 7

4。2不同果胶酶浓度对原生质体分离的影响 8

讨论 10

参考文献 12

致谢 14

1 前言

植物的原生质体是指去除细胞壁后，仅被质膜包被的单个生活细胞。植物细胞在去除了细胞壁后，仍保持着细胞全能性，在适宜的外界环境下，任何一个细胞都可以发育成一个新的个体[1]。分离获得大量均一、高活性的原生质体，被广泛应用于植物快速繁殖、远缘杂交、细胞融合、细胞体突变[2,3]以及品种改良和培育新品种[4]。

植物的原生质体，是体细胞融合及植物体再生研究的基础[5]，是研究细胞生理功能的一种理想的材料，同时是外源基因遗传转化的合适受体[6]。植物原生质体也是植物基因工程的理想受体，可为外源基因、DNA片段、细胞器、染色体捕获创造新的方法[7]。因此我们需要获得大量均一、高活性的原生质体。