2。4 试验设计

2。4。1 探究不同浓度盐胁迫对水稻幼苗的影响

对水稻幼苗进行不同浓度的盐胁迫处理，浓度分别为0 mmol/L ，50mmol/L，100mmol/L和200mmol/L NaCl。每隔2天重新换营养液并再次加入上述浓度的氯化钠[13]。分别在盐胁迫处理0h、6h、1d、2d、4d、6d、8d后，进行随机采样，重复2-3次，测定植株的株高、叶片POD、SOD以及叶片相对电导率。

2。4。2探究H2S对盐胁迫下的水稻幼苗的影响

对水稻幼苗进行分别做如下处理：0 mmol/L，50mmol/LNaCl+0。2mmol/L NaHS，100mmol/LNaCl+0。2mmol/L NaHS。每隔2天重新换营养液并重复进行上述处理。分别在盐胁迫处理0h、6h、1d、2d、4d、6d、8d后，进行随机采样，重复2-3次，测定植株的株高、叶片POD、SOD以及叶片相对电导率。

2。5 各项指标的测定方法

2。5。1植株的生长情况

分别在盐胁迫处理0h、6h、1d、2d、4d、6d、8d后，用直尺进行测量所有植株的株高，记录数据并计算出每盆植株株高的平均值[14]。

2。5。2 叶片POD、SOD活性的测定文献综述

酶液制备：取0。2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1。6mL 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7。8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、8000r/min下离心20min，上清液即为酶液。

POD 活性测定采用愈创木酚法：取200mL PBS（0。2mol/L，pH6。0），加入0。076mL液体（原液）愈创木酚（2-甲氧基酚）加热搅拌溶解，冷却后加入0。112mL30%的 H2O2混匀后保存于冰箱中备用。取3mL反应液并加入30µL酶液，以PBS为对照调零，而后测定OD470值（测定40s）。（边加样边测定，测定前等待5s，动作要快，如果慢的话，要保证每一个样品从加样到开始计时的时间相差不大）。

SOD 活性测定采用氮蓝四唑比色法：每组取4支试管，分别加入配制好的3mL反应混合液（Met溶液162mL，EDTA- Na2溶液0。6mL，磷酸缓冲液5。4mL，NBT溶液6mL，核黄素溶液6mL）和30µL酶液于其中2支试管中，另外两只对照管，其中一支试管取3mL反应混合液加入30mLPBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另一支加缓冲液置于暗中测定时用于调零。将对照管置于暗处，其它三管于4000lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致）。反应结束后，以不光照的对照管做空白，避光测OD560（出现颜色即可测定）。

计算公式参照李合生[15]的方法：

POD=（ΔA470×Vt）/（W×Vs×0。01×t） （u/g min）

ΔA470：为反应时间内吸光度的变化；W为样品鲜重（g）；t为反应时间（min）；Vt为提取酶液总体积（ml，1。6mL）；Vs为测定时取用酶液体积（mL，30mL）。

SOD总活性=[(Ack-AE)×V]/(1/2Ack×W×Vt)。

SOD总活性以鲜重酶单位每克表示（u/g FW）Ack为照光对照管道吸光度；AE为样品管的吸光度；V为样品液总体积（mL，1。6mL，加入PBS的体积）；Vt为测定时代酶液用量（mL，30µL）；W为样品鲜重（g，测定时应换算为叶绿体的质量mg）。其中V为提取液体积（1。6mL）,W为样品鲜重（0。2g）。