摘要由于国内现有单价抗舟山眼镜蛇毒血清仅以单一地理种群蛇毒免疫马匹制备而来，其对于临床治疗其它地理种群舟山眼镜蛇咬伤的作用缺少明确的实验评估，此外，评估不同地理种群的合并蛇毒制备混合抗蛇毒血清对于临床治疗的意义也有待明确。因此，本项目采集国内七个地理种群（海南五指山、广西百色、广西全州、广东翁源、浙江丽水、浙江舟山和江西赣州）的舟山眼镜蛇毒，分别以指名种（浙江舟山种群）和七个种群混合蛇毒为抗原，免疫大白兔制备抗舟山眼镜蛇毒血清；并以商业用抗舟山眼镜蛇毒血清（制备抗原地理来源未知）、抗舟山种群蛇毒血清和抗混合种群蛇毒血清分别与七个地理种群蛇毒进行Western反应，评价三类抗舟山眼镜蛇毒血清的效价。结果表明，当前商用抗舟山眼镜蛇毒血清与实验室自制兔抗单一种群蛇毒血清对于七种蛇毒的中和能力差异显著，而混合抗蛇毒血清对于中和各种群蛇毒的能力区域相同。46690

Abstract

  Due to the existing domestic unit price anti-venom serum Naja venom only a single geographic populations of immune horses prepared from its lack of a clear experimental evaluation of clinical treatment for other geographic populations Naja bites role, in addition, to assess the combined venom from different geographic populations Mixed antivenin preparation for clinical significance has yet to be defined. Therefore, the project collected domestic seven geographic populations (Wuzhishan, Baise, Guangxi statewide, Wengyuan, Guangdong, Zhejiang, Lishui, Zhoushan, Zhejiang and Jiangxi Ganzhou) of Naja venom, respectively named species (Zhoushan population) and seven Mixed populations venom immunize rabbits Naja prepare anti-venom serum; and commercial anti-venom serum Naja (antigen preparation geographical origin unknown), anti-venom serum and anti-Zhoushan populations mixed population of seven geographical venom serum, respectively Population venom by Western reaction to evaluate three types of anti-Naja venom serum titer. The results show that the current commercial anti-venom serum and laboratory Naja homemade rabbit anti-venom serum for a single population and the ability of a significant difference in seven venom, mixed antivenom for the region and the ability of various groups of the same venom.  

毕业论文关键词：舟山眼镜蛇；地理种群；蛇毒；免疫原性

Key words：Naja; geographic populations; venom; immunogenicity

目    录

1 引言 4

2 材料和方法 4

2.1 蛇毒和商用抗血清 4

2.2 蛋白浓度测定 4

2.3 大白兔抗蛇毒血清制备 5

2.4SDS-PAGE和western blot 5

3 结论 5

参考文献 7

致谢 7

1 引言

  全世界约有蛇类2700种，其中毒蛇占500余种。我国幅员辽阔，地处热带至亚寒带，地貌多样，具有平原、丘陵、山地、草原、荒漠、沼泽等等复杂多样的生态地理环境，为蛇类生存繁衍以及进化提供了良好的自然条件。同一物种的不同种群生活于不同的地理单元，其形态、生态和生理等方面可能存在差异。在许多报道中我们发现，尽管在不同地理环境下，分布着不同种类的毒蛇，但是由眼镜蛇科和蝮亚科造成的严重蛇伤在各地均有发生，并占据着蛇伤病例的主要地位。

  以眼镜蛇为例，魏继福等从浙江舟山种眼镜蛇蛇毒中分离到两个神经毒素，从云南孟加拉种蛇毒中得到三个神经毒素。这些神经毒素都是短链神经毒素。说明两个蛇种与已报道的台湾及浙江的舟山种眼镜蛇很相似，蛇毒中以短链神经毒素为主，但从另外泰国孟加拉种眼镜蛇蛇毒中则以长链神经毒素为主。实验中了排除因为种属分类、季节和年龄而导致的不确定因素，此现象基本上可以确定地区间的气候、地理环境或者眼镜蛇的食物差别相关会对蛇毒成分产生一定的影响。有关眼镜蛇毒全蛋白组构成的研究仅见于Li等（2004）的报道，且相关工作仅涉及对一个来源地的舟山眼镜蛇毒进行的分析。向莹等 （2008）成功分离和检测了孟加拉眼镜蛇毒中的一个神经活性组分。Nawarak等（2003）用双向电泳检测了舟山眼镜蛇中国大陆种群（未知具体采集地）、台湾台东和西部地区种群蛇毒组成，发现差异主要集中在14-45 kDa的碱性组分区。本实验室曾对五个舟山眼镜蛇地理种群蛇毒特征进行过系统研究，发现蛇毒组成和酶活性存在显著的种群间差异，特别是广西百色种群有明显区别于其它种群的特异性组分（高建芳, 2010）。此外，本实验室利用高效液相检测舟山眼镜蛇海南五指山、广西百色、广西全州、浙江丽水和浙江定海五个种群蛇毒，发现各种群虽然都具有30个组分峰，但有6个组分出峰时间明显不同，预示可能为种群间完全不同类型的组分。对其中24个具有相同出峰时间的组分进行含量比较，发现种群内变异系数分别为五指山29，百色40，全州20，丽水28和定海43，而种群间变异系数为53，这种差异特征预示了不同种群舟山眼镜蛇咬伤的临床症状差异会较大。