氨基酸液态有机肥对小麦生长及土壤中重金属含量的影响(3)
1 材料与方法
1.1 供试材料
供试植物为小麦(扬麦8号)，购于江苏省农科院。供试土壤为汤山、栖霞山、汕头三地重金属污染的土壤样本，土壤晾干过100目筛后待用。氨基酸液态有机肥由生物学实验中心提供（为资环院课题组研制，建议稀释倍数为500），实验中所用各项试剂均由生物学实验教学中心提供。
1.2 试验设计
1.2.1氨基酸液态有机肥在土壤中的溶解效果分析
采集汤山、栖霞山、汕头三地重金属污染的土壤样本，晾干后称量。分别称量5.0000g（误差0.0005)土壤于50mL离心管中。将氨基酸液态有机肥分别稀释至10倍 、20倍、30倍、40倍、50倍，每个浓度设置4组重复，并分别设置对照组（对照组的PH值用浓硫酸调节至与施肥组的PH值相同）。向加了土壤的离心管中分别加入3mL稀释过的有机肥。静置后分别于1、2、4、8、16天取样。
1.2.2氨基酸液态有机肥对小麦的影响
采集栖霞山样土，烘干后待用。准备33个相同的花盆，每盆称量500.00g土壤填充进去。在每个花盆内均匀撒入25粒小麦种子，并覆上40.00g土壤，每盆浇水50mL后置于阳光房培育。期间每隔两到三天浇水，每盆浇水量保持相同（都为50mL），要始终保持土壤湿润。待小麦苗长势良好时即可间苗（约种植后两周）。每盆留下生长情况相似的小麦苗15株。将氨基酸液态有机肥分别稀释10倍、50倍、100倍、200倍和500倍，对应准备5种去离子水（用浓硫酸调节至与稀释后的液态有机肥的PH值相同）。共设置11种处理，每种处理设置三个重复。
待麦苗间出现明显差异后即可取样（期间施肥4次）。取样前测量每一盆中的每一株麦苗的株高（土上部分），并做好记录。将麦苗连根拔出（尽量保持根系完整），用清水洗净，并用吸水纸拭干后减去根部，每盆的根、叶、土分别装入信封保存。分别称量每个信封中材料的湿重，并做好记录。称量新鲜小麦叶片测量其叶绿素、丙二醛及可溶性蛋白含量。剩余材料全部放入80℃烘箱，烘干后分别称量干重。
1.3 分析方法
1.3.1 氯化钙提取态重金属含量
向每个离心管中加入20mL0.01mol/L的CaCl2溶液，在200r/min的摇床摇晃2小时（充分混匀）。取出离心管静置半小时以上后过滤（滤液保证在8～10mL），将滤液作好标记，置于冰箱冷藏保存。对这些滤液进行元素分析，比较有机肥在土壤中的溶解效果[15]。
1.3.2 叶绿素含量的测定
称取0.1g叶片，剪碎(叶片越小越好)加入5mL试管，加入2mL浸提液（丙酮：乙醇 2:1），隔夜后定容至5mL测吸光值（叶片发白即可）。将管内溶液倒入比色皿，分别在645nm和663nm处测吸光值，
叶绿素 a(chla) 含量(mg/g) = (12.7×A663-2.69×A645)×V/(1000W) ;
叶绿素 b(chb) 含量(mg/g)= (22.7×A645-4.68×A663)×V/(1000W);
叶绿素总含量 (mg/g) = chla含量 + chlb含量。（式中A663、A645分别为相应波长下的吸光度值, V 为提取液体积, W 为所取叶片质量）[16]。