摘要从西溪湿地水体沉积物中取得样品，经驯化培养、分离纯化和初步验证菌株的硝化活性，初步筛选出一株高效的异养硝化菌M307，并进一步对该菌株的脱氮特性进行研究。研究表明，菌株M307在氨氮初始浓度为186mg/L的培养基中培养24h，培养基中氨氮的去除率达94.7%，36h时氨氮的去除率高达100%，且最终没有硝态氮的积累，异养硝化能力较好。通过对该菌株的形态鉴定、生理生化鉴定和系统发育分析，初步鉴定M307菌株为假单胞菌属（Pseudomonas）。60541

Abstract  A heterotrophic nitrification bacterium named M307 was isolated from the sediment of Xixi wetland using the enrichment medium. The experiment results showed that M307 strain can reduce all the ammonia nitrogen within 36h when the ammonia nitrogen concentration was 186mg/L in medium without the accumulation of nitrate nitrogen. The M307 strain was identified based on morphological characteristics, physiological tests and 16S rRNA gene sequencing. The results showed that M307 strain was closely related to the member of Pseudomonas.

毕业论文关键词：异养硝化菌； 分离； 脱氮作用；鉴定

Keyword: heterotrophic nitrifier; isolation; denitrification; identification

目录 3

引言 4

1 材料与方法 4

1.1 材料 4

1.1.1 菌株来源 4

1.1.2 培养基 5

1.1.3主要试剂和仪器设备 5

1.2 菌株的分离纯化 6

1.2.1菌株的分离、纯化 6

1.2.2菌株脱氮活性的初步验证 6

1.3 菌株的异养硝化特性研究 7

1.3.1 生长曲线及pH的测定 7

1.3.2 硝化作用特征曲线测定 7

1.4 菌株的形态学和生理生化鉴定 7

1.4.1 形态学鉴定 7

1.4.2 生理生化鉴定 7

1.5 16S rRNA的PCR扩增与测序、系统发育分析 8

1.5.1细菌DNA的提取 8

1.5.2 16S rRNA 的 PCR 扩增与测序 9

1.5.3系统发育分析 9

2 结果与分析 10

2.1 菌株的分离纯化 10

2.2 脱氮菌筛选 10

2.3 M307菌株的生长曲线 10

2.4 M307菌株的异养硝化特性 11

2.5菌株的鉴定 12

2.5.1 形态学鉴定 12

2.5.2 生理生化鉴定 12

2.3.3系统发育分析 14

3讨论 14

参考文献 16

致谢 16

引言

随着工农业的迅速发展，水体氮污染问题日益加重，引起人们的密切关注。水体的氮污染主要来自工农业生产过程中和生活污水含氮废水的排入，以及土壤中的氮肥随雨水的冲淋泄入。水体氮污染会造成多方面的危害，包括影响水源，引起水体的富营养化，增加水处理的成本和危害人类的身体健康等。因此脱氮也就成为了污水治理的重要课题。在众多脱氮方法中，生物脱氮法以其环保、低耗、经济且效果良好等优势，被广泛应用[1]。硝化细菌是生物脱氮的主要功能微生物，包括自养硝化细菌和异养硝化细菌[2]。与自养硝化细菌相比，异养硝化细菌可以在降解氨氮的同时消耗水体中的有机污染物，并具有环境适应能力强，可耐受低溶解氧，世代周期短，生长速度快，氨氮去除率高的特点[2-5]。所以近年来异养硝化细菌的选育成为热点。