第二章．材料与方法 11

2.1 菌种 11

2.2 实验材料及仪器 11

2.2.1 实验材料 11

2.2.2 仪器 12

2.3 培养基和培养条件 12

2.3.1 PDA培养基 12

2.3.2 种子培养基 12

2.3.3发酵培养基 12

2.4 发酵实验操作 13

2.4.1 种子培养 13

2.4.2 摇瓶发酵 13

2.4.3 发酵罐发酵 13

2.5 分析方法 14

2.5.1菌体干重分析 14

2.5.2 糖浓度分析 14

2.5.3 聚苹果酸分析 14

第三章．结果与讨论 15

3.1考察A.pullulans HA-4D菌对糖蜜中的主要糖分以及糖蜜的利用情况 15

3.2考察糖蜜预处理对聚苹果酸发酵的影响 15

3.3 聚苹果酸发酵实验 17

3.3.1初糖浓度的影响 17

3.3.2 5L发酵罐分批发酵 18

3.3.3 5L发酵罐补料-分批发酵 19

结论 20

参考文献 21

致  谢 22

第一章 前言

聚苹果酸(polymalic acid，PMA)是以L-苹果酸为唯一单体,通过酯键连接而成的聚合物,具有高度的水溶性、生物可降解性和生物可吸收性等优良性质[1]。PMA 作为一种可溶性脂肪族聚酯，在完全分解或完全燃烧后，最终产物是无危害的二氧化碳和水，可被植物吸收并加以利用，对环境基本没有影响[2]，是一种环保的新型生物高分子材料[3]。PMA 水溶性较好，在水溶液中可自发或酶促降解成小分子苹果酸，可参与生物体内三羧酸循环而被吸收并被加以利用，无任何毒副作用。PMA 的无毒性、无免疫原性、良好生物相溶性和生物降解性使其在医学和药学等领域的研究中得到日益广泛的关注[4]。论文网

1 聚苹果酸概述

1.1 聚苹果酸的结构

PMA是一种含有一个羟基的四碳二元羟酸，其分子式为HOOCCH2（OH）CH2COOH。PMA主要有三种结构，分别为α型、β型和γ型，三种结构均可以通过化学合成法进行合成[5]，但是β型存在于生物体内，通过化学合成法合成较为困难。

图1-1，PMA的三种基本结构

由于苹果酸有两种旋光性，所以从理论上来说，苹果酸的聚合物有三种不同的基本立体结构，分别为聚L-苹果酸，聚D-苹果酸和聚L，D-苹果酸。但是在自然界生物体内，天然合成的苹果酸是β-L-苹果酸，其聚合物为聚β-L-苹果酸。这种PMA有很好的生物学特性和广阔的医药学应用前景[6]，是当前热门的生物学研究材料。

1.2 聚苹果酸的性质

PMA呈现很强的阴离子性，是一种阴离子聚合物。在常态下以白色固体形式存在，由于其分子大小不一，所以其理化性质不定。PMA具有许多游离羧基，所以相对来说易与其他功能基团或小分子药物反应形成PMA衍生物，从而定向改变PMA的性质得到具有特定功能的产物[7]。同时由于 L-苹果酸本身属于生物体内三羧酸循环的中间体，所以PMA相对来说容易在生物体内通过正常的三羧酸循环代谢途径分解，具有生物可降解性和生物相容性。这些优良的特性使PMA有很广泛的用途[8]。 文献综述