目前国内已经利用化学合成、基因串联及蛋白融合策略等方式表达GLP-1及GLP-1类似物。例如钱凯等在毕赤酵母中表达与纯化 GLP-1 类似物[4]。以及利用基因工程技术构建大肠杆菌表达系统，获得融合蛋白的高表达，以此来纯化GLP-1及其类似物。至于利用化学合成法制备活性小肽，由于化学合成法步骤繁琐，污染环境，制备成本高，因此不适合大规模生产。

分离和提纯蛋白质方法多种多样， 最重要的两种就是电泳和层析[5]本实验通过离子交换层析分离纯化GLP-1类似物，把分离出的峰进行电泳检测，分析分离的效果。

离子交换层析是一种吸附层析，根据带电荷的分子和层析填料上相反电荷之间可逆的相互作用进行分离，是基于分子之间电荷差异进行分离的一门技术。与化学法相比，它分离的条件温和，不易引起分子结构的变化[6-7]。

离子交换层析是发展最早的层析技术之一[8]最早用来分离纯化生物大分子的离子交换介质是纤维素[9]。纤维素由于其容量低、流速慢[10]等缺点被其他物质

替代，离子交换层析介质的性能得到了极大改善[11]。本文利用离子交换层析分离纯化GLP-1类似物，分别考察了不同类型的填料、缓冲液ph、尿素浓度、洗脱时间等条件对离子交换色谱法分离纯化GLP-1类似物的影响，再把分离出的峰通过电泳检测目的蛋白纯度。通过单因素实验逐步摸索方法，分离得到纯度更高的蛋白，为人类的生产实践提供一定的帮助。

1 材料与方法

1.1 主要原料与试剂

GLP-1类似物粗品。尿素、EDTA、Na2SO3 、氢氧化钠、碳酸钾、乙醇购自西陇化工股份有限公司产品。Tris购自GENVIEW公司，氯化钠购自国药集团化学试剂有限公司。QFF填料购自GE公司产品。UniQ-30s填料购自苏州纳微生物科技有限公司产品。

1.2 主要实验仪器

AKTA  explorer                           上海智岩科学仪器有限公司

SCG 蛋白纯化仪                          苏州赛分科技有限公司

SM-2型磁力搅拌器                        上海志威电器有限公司

高压匀浆机                               ATS 工业系统有限公司

蠕动泵                                   无锡市天利流体设备厂

紫外可见分光光度计                       岛津公司

    高速冷冻离心机                           长沙湘仪离心机有限公司     

1.3 实验方法

1.3.1 GLP-1类似物的制备 

制备GLP-1类似物，其工艺流程如下:菌体称重，以1:8的比例用TE溶解，高压匀浆机（40Hz），40min/遍，破碎菌体，两遍。离心机8500rpm，离心20min，弃上清，收集沉淀，1:10加入蒸馏水溶解。按照800g/L加入尿素，1:100加入0.5M/L EDTA，31g/L加入Na2SO3 ，15.5g/L加入 Na2S4O6 ，搅拌，室温放置过夜。8500rpm离心20min，收集上清，通过750k中空纤维柱，按6M /L加入尿素溶液。将得到的溶液制备复性液，碳酸钾用蒸馏水溶解后，加入到待复性样品，抽真空，充氮气，室温放置过夜。按100mM/L 加入硫酸铜，空气中放置4h。通

过3k纤维素膜，调节pH，1:40加入rEK过夜，得到GLP-1类似物。

 1.3.2 离子交换层析分离纯化的步骤