1 绪论

嗜盐细菌通常定义为需要NaCl才能生长的微生物，多生活在海洋、盐湖、盐场等高盐环境中。为适应其特殊的生长环境，嗜盐细菌一般具有特殊的生理结构与代谢机制。根据对盐的不同需求，一般将嗜盐细菌分为5类，分别为非嗜盐菌、轻度嗜盐细菌、中度嗜盐细菌、边界极端嗜盐细菌和极端嗜盐细菌论文网，其中部分极端嗜盐细菌为嗜盐古菌，除这些嗜盐菌外，环境中还存在许多其他的耐盐微生物，适合它们生长的盐浓度范围较宽，即使在缺乏盐时它们也有最佳的生长速率，其生长的盐浓度范围为0至大于1。0mol/L，最适范围一般小于0。2mol/L；万能耐盐微生物能在盐浓度更宽的范围内生长，适合万能微生物生长的盐浓度范围为0至大于3。0mol/L，最适范围为0。2～0。5mol/L [1]。我国盐湖资源丰富，众多的盐湖中生长着许多嗜盐微生物，目前国内已经对内蒙古、西藏、新疆等地的盐湖中的嗜盐微生物进行了大量研究[2-3]，研究发现嗜盐细菌主要通过在其体内产生并积累相溶性溶质来适应外界的高盐环境[4]。近年来，国内对嗜盐菌的研究多集中在嗜盐菌的筛选分离，生理生化特性研究、耐盐相关基因的克隆和16S r DNA基因测序等方面，对其最适盐浓度的研究多只通过形态学观察或利用分光光度计测其吸光度从而寻找嗜盐细菌的最适盐浓度，利用流式细胞仪来探究其最适盐浓度的研究还没有。近年来, 流式细胞术(Flow Cytometry，FCM) 作为一种高效方便且有价值的方法常常替代常规方法来检测微生物的活性[5] 。流式细胞仪具有高通量、高灵敏度、多参数精确定量、测量等优点，可以一次性检测几千个细胞,自动化程度高, 每次检测都能获得丰富的信息量[6]。本论文选取了碘化丙锭(propidium iodide, PI)荧光染料染色细胞，用流式细胞仪检测不同盐浓度胁迫下嗜盐细菌CK4的死活比，确定嗜盐细菌CK4的最适生长的盐浓度。流式细胞术可以高纯度、高通量地分离和富集特定状态(或表型)的细胞亚群，这样的优点可以为后续深入的研究提供有力保障。

茶卡盐湖是我国四大盐湖之一，地处青海省海西蒙古族藏族自治州乌兰县茶卡镇附近〔λ(E)99°02′～99°02′,φ(N)36°18′～36°45′〕，是柴达木盆地著名的天然结晶盐湖，存在大量的石盐盐湖矿床。茶卡盐湖盐类沉积矿物由石膏、芒硝、石盐、泻利盐、无水芒硝、水石盐和白钠镁矾等组成。茶卡盐湖周边的土质盐碱度较高，其环境非常适合极端微生物的生长，是极端微生物生存的大本营[7]，极端嗜盐碱微生物资源十分丰富,且微生物为了适应其独特的生长环境都具有典型的生理生化适应性[9]。茶卡盐湖作为我国重要的盐湖资源对维护生态平衡，丰富物种多样性等具有十分重要的作用，它们对生态环境的价值以及对学术的重要性已经受到国内外学术界的广泛关注。文献综述

目前国内学者对嗜盐微生物的研究相对较少， 2012年洒威和焦迎春从青海茶卡盐湖中分离出极端嗜盐碱真菌，并对其嗜盐性进行研究，根据检测真菌的干重得出：中度嗜盐菌在盐浓度为12%和15%时便停止生长，极度嗜盐菌在盐浓度为15%时依旧能够生长[10]。同年，沈国平，朱德锐，刘建等对青海湖嗜盐菌种进行分离纯化，表明水体中以中度嗜盐菌为主，并研究各种嗜盐菌的生长特性，研究结果显示嗜盐细菌能够生长的盐度范围为：0～2。99mol/L[11]。 鉴于以上研究，本论文基于茶卡湖生态环境的特殊性，筛选分离出茶卡盐湖嗜盐细菌微生物种资源，利用分子鉴定方法对嗜盐细菌进行分类学地位研究，确定嗜盐细菌类群，初步了解茶卡湖嗜盐菌种类的分布情况与环境适应性。并采用流式细胞仪检测不同盐浓度下嗜盐细菌的活菌数量，确定嗜盐细菌的最适生长盐度，以期为盐湖微生物的挖掘和利用提供实验数据。