Pb是影响水生植物生长的重金属之一,其浓度不同,对鸭跖草里的一些物质,如丙二醛、叶绿素等的合成以及过氧化物酶的活性和光合指标有不同的促进或抑制作用,从而影响鸭跖草的生长。在本次研究中,通过水培鸭跖草,让其在不同浓度梯度下生长,然后定期测量鸭跖草中各生理指标的的含量,及光合数据,从而分析出鸭跖草对铅的耐受性程度,这不但可以为解决重金属污染问题尽绵薄之力,也可为今后在栽培养护鸭跖草方面提供依据。
2。实验方法
2。1鸭跖草培养条件和铅处理方法
选生长均匀的鸭跖草幼苗30株,大概每株株高为25cm左右,分别将其种入5个栽培盆中,每盆种植6棵幼苗,分别用Pb浓度为0mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L的溶液处理。然后,将配置好的五个不同浓度的Pb溶液浇入盆中,每盆都浇1L,看土壤的湿润程度,如果土壤不太湿,补浇自来水,让其生长在水生环境下,最后,将鸭跖草置于温室大棚中,让其在同一环境条件下生长。定期到大棚去观察鸭跖草的生长状况,观察铅对其生长的影响,并定期补浇自来水,让其在其它条件充足的情况下生长,控制变量为一个,即铅溶液的浓度。以方便后来数据比较好分析,减少其它因素的影响。
2。2鸭跖草样品的收集
每隔10天测一次鸭跖草的光合及生理指标,测完后补浇Pb溶液。这样连续三次。然后将其放入样品袋中,不同栽培浓度下的植物叶片放在不同的样品袋中,分别标记好。
2。3鸭跖草中各生理指标的测定
2。3。1丙二醛含量测定
①实验仪器设备
分光光度计、研钵、剪刀、恒温水浴、试管(20ml)4支、离心机、移液枪
②实验试剂
5%三氯醋酸、0。5%硫代巴比妥酸(用5%三氯醋酸溶解定容)、0。05mol/l磷酸缓冲液(pH7。8)
③实验材料
正常生长以及经逆境处理的鸭跖草叶片
④实验方法与步骤
取鸭跖草叶片3-5片,用蒸馏水擦洗干净,用剪刀减去鸭跖草的茎,然后留取无茎部分的叶。将其剪碎,称取该叶片0。3g,放入置于冰浴中的研钵,加入少量的SiO2(帮助研磨)和2mL0。05mol/l磷酸缓冲液,研磨成匀浆。将匀浆转入试管中,再用3mL0。05mol/l磷酸缓冲液,分两次冲洗合并提取液。
在提取液中加入5mL0。5%硫代巴比妥酸溶液,摇匀。文献综述
将试管放入沸水浴中煮沸10min,(自试管内溶液中出现小气泡开始计时)。到时间后,将试管取出并放入冷水浴中。
待试管内溶液冷却后,3000g离心15min,取上清液并量其体积。以0。5%硫代巴比妥酸溶液为空白测532nm、600nm和450nm处的吸光值。
结果计算
MDA(mmol·g-1FW)=[6。452*(A532-A600)-0。559*A450]*[Vt/(Vs*FW)]
Vt为提取液总体积(ml);Vs为测定用提取液体积(ml);FW为样品鲜重(g)
2。3。2过氧化物酶活性测定
①实验仪器设备
分光光度计、离心机、研钵、移液管(0。5mL、1mL各2支,5mL1支,10mL2支)
容量瓶50mL3个、具塞试管30支、恒温水浴、移液枪
②实验试剂
0。1%愈创木酚、5%偏磷酸、0。18%双氧水:取30%双氧水3mL,蒸馏水定容至50mL、标准母液:吸取5%K2Cr2O71。2mL和纯化的Co(NO3)2溶液50mL,混合后加蒸馏水稀释7倍,即为每毫升相当于6。75μg四邻甲氧基苯酚标准母液。
③实验材料
正常生长以及经逆境处理的鸭跖草叶片
④实验方法与步骤
1)POD的提取:取植物叶片,剪碎混匀,称取0。5g于研钵中,加少量石英砂、碳酸钙和适量蒸馏水,冰浴研磨匀浆,蒸馏水定量至50mL,摇匀后离心,上清液即为待测酶液。