参考文献 20

1 引言

1。1氨基酸脱氢酶的介绍

氨基酸脱氢酶能够被概括为两种类型：

一种是可以可逆催化氨基酸脱氨生产酸、氨及还原型NADH，对于这一类型的脱氢酶，其辅基是烟酰胺腺嘌呤(NAD)，在糖代谢和氨基酸代谢过程中，它担当着重要的角色作用，因此被普遍应用于药品、农药、食物等范畴，从而可以客观地推断其拥有优秀的发展前景。NAD+是很多脱氢酶的受体，譬如苹果酸酶等。

第二种是以黄素为辅基的脱氢酶，在发生反应过程中，辅基会发生氧化还原反应。比方琥珀酸脱氢酶，还有胆碱脱氢酶等[1]。在此当中，FAD是琥珀酸脱氢酶的辅基，继而再与其他物质连接。除了黄素腺嘌呤二核苷酸FAD，还有黄素单核苷酸FMN为辅基。譬喻NADH脱氢酶的辅基就是它。论文网

氨基酸有右旋和左旋两种结构方式，而且当下有些脱氢酶还可以在大肠杆菌中获得表达，比如L-氨基酸脱氢酶。凭据试验数据显示，细胞膜和L-氨基酸脱氢酶的密切相关性很高，细胞膜应该在它酶活方面担当着无法缺少的重要因素[2]，通过大量实验成果可知，D-氨基酸脱氢酶大部分以膜蛋白的结构方式存在于细菌中。

1。2 D-氨基酸脱氢酶的研究现状与前景

1。3 产脱氢酶菌的获取方法

对于筛菌的方法，一种是根据其特性来筛选获得菌株，例如筛选出烟酸脱氢酶产生菌的方法，建立了一种在紫外显影法基础上，能够更加快速的方法：培养好细菌后，6-羟基烟酸在紫外照射下能够显影，因为这一特点，所以这是一种可以筛选出产烟酸脱氢酶的目的菌株的简单有效方法[4]。

乳酸脱氢酶(LDH)能够可逆地催化乳酸和丙酮酸两者之间的转变，在糖酵解过程当中，它是担当重要地位的一种酶。虽然跟乳酸脱氢酶相关的研究工作仍旧很多，我们也从中了解了很多关于其性质的很多知识，但是我们对于其他菌体，譬喻枯草芽孢杆菌的乳酸脱氢酶的钻探却很少。通过普遍筛选得到目的芽孢杆菌，然后也可以实现得到高量生产乳酸脱氢酶的菌株的目的[5]。

另有操纵基因技术手段得到目的菌株，S-扁桃酸脱氢酶可以选择性催化S-扁桃酸产生苯甲酰甲酸。通过 PCR扩增获得S-扁桃酸脱氢酶全长基因，然后是表达载体的构建，转化大肠杆菌后，诱导后基因获得表达，是以工程菌细胞能够让S-扁桃酸生产苯甲酰甲酸[6,7]。从菌体中获得一段含有D-型氨基酸脱氢酶的全部相当重要的序列。经TTC培养基判定，它对很多D-型氨基酸都起催化的作用[8]。

还有可以经过变异得到脱氢酶菌株，譬如野生型黄嘌呤脱氢酶的活性部位的荚膜红假单胞菌和变异的快速反应动力学进行了表征各种嘌呤基。黄嘌呤作为底物，K（红色）（在高的底物酶还原的速率限制）下降了约20倍，在r310k变种，在r310m变异[9-12]。变异菌株的菌丝体在形态，以及生活的特性还有谱带方面与原来的菌体都会有不一样的地方[13-14]。红外CO2激光，高压静电场，还有诱导剂等等方法可以通过变异的手段，得到目的菌株，这已经在很多实验中获得了成功的例子[15-17]。

1。4研究课题内容与目的

苯甘氨酸在药物合成中间体是一个很重要的角色，它拥有光学活性[18]。左旋苯甘氨酸（D-苯甘氨酸）不单单能够用于新药制造，还能够被用于作为青霉素和头孢菌素的中间体，因此制出来氨苄青霉素和头孢等药物。

以FAD为辅酶的脱氢酶活力测定方法目前主要有五种。硫酸甲酯吩嗪（PMS）反应法，铁氰化钾[K3Fe（CN）6]还原法，TTC（氯化三苯四氮唑）法，MTT3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐法，NBT（氯化硝基四氮唑蓝）法。文献综述