用Swillens[13]提出的只包含一个结合位点的饱和结合模型对吸附等温曲线进行计算确定GASBD(s)蛋白与淀粉之间的结合参数。下面的公式描述了由质量作用定律推导出的众所周知的结合模型：B = Bmax F/(Kd + F) ，其中 B (μM/g) 代表是每克淀粉结合的蛋白质浓度，Bmax (μM/g) 代表是每克淀粉结合的蛋白质的最大值，F (μM) 代表是系统中的游离蛋白质和Kd (μM)代表是平衡解离常数。文献综述

4  实验结果

4。1  GASBD(s)重组蛋白与淀粉结合的定性分析

    将1mL不同浓度的GASBD(s)蛋白溶液与不溶性玉米淀粉混合，在25℃下保温2h后离心，然后对上清液中的蛋白质(未结合的蛋白质)和淀粉沉淀中的蛋白质(结合的蛋白质)进行SDS-PAGE分析。由图1可知，在淀粉沉淀中有很高浓度的GASBD(s)，而在淀粉沉淀中检测不到BSA的存在。这表明，GASBD(s)蛋白都展现出很强的淀粉结合特性，而牛血清白蛋白没有淀粉结合能力。由图还可发现，GASBD(s)蛋白的亲和力随着融合蛋白中SBD串联重复数的增加而增强。

图1 GASBD(s) 重组蛋白与淀粉结合的定性分析

GASBD (A), GASBD2 (B), GASBD3 (C)和GASBD4 (D)蛋白溶液分别与不溶性玉米淀粉保温2小时，离心后对上清液中的蛋白质和淀粉沉淀中的蛋白质进行定性分析。总蛋白浓度分别为200μg/mL（泳道1），100μg/mL (泳道2)，50μg/mL (泳道3)。P：淀粉中结合的蛋白、S：上清液中的蛋白。200μg/mL标准牛血清蛋白(E) 用作非特异性结合的对照。

Fig1 Binding of the GASBD(s) proteins to starch。

The purified GASBD(A), GASBD2(B), GASBD3(C), GASBD4(D) protein solutions were incubated with insoluble corn starch。 After centrifugation, the proteins in the supernatant and the precipitate were analyzed by SDS-PAGE。 The total protein concentrations are 200 μg/mL (Lane1), 100 μg/mL (Lane2), and 50 μg/mL (Lane3)。 P: Proteins in precipitates; S: Proteins in supernatants。 200 μg/mL BSA (E) served as a negative control。 来-自~优+尔=论.文,网www.youerw.com +QQ752018766-

4。2  GASBD(s)重组蛋白的结合曲线

    为了确定不溶性玉米淀粉上蛋白结合量到达最大值所需要的时间，进行了GASBD(s)蛋白结合量随时间变化的实验。结果(图2)表明，在开始的60 min内，不溶性淀粉上结合的GASBD蛋白量与保温时间之间呈线性关系，随着时间的增加结合的蛋白量也逐渐的增加。在2 h时，GASBD蛋白的结合量达到最大值(图2)，此后，随着时间的增加蛋白的结合量将不再变化。由图还可知，不同浓度的GASBD蛋白的结合平衡曲线没有明显差异。用同样的方法对GASBD2，GASBD3和GASBD4蛋白与不溶性玉米淀粉的结合曲线进行了分析，结果表明，GASBD2，GASBD3和GASBD4蛋白在淀粉粒表面达到最大结合量所需要的时间也是2 h，这与GASBD蛋白的结果是一致的。