2．2  PenMV VPg在玉米原生质体中的定位 9

2．3  pGD-YFP-VPg载体构建 9

2．4  农杆菌浸润本氏烟荧光观察结果 10

3  讨论 10

致谢 11

参考文献 11

白草花叶病毒VPg蛋白亚细胞定位研究

引言玉米矮花叶病(maize dwarf mosaic disease, MDM)是世界上玉米产区普遍发生的病毒病害之一，最早于1963年，该病在美国俄亥俄州首次报道[1]，我国于1968年在河南省首次报道[2]。近年来的研究表明玉米矮花叶病可由一至多种病毒系统侵染引起,均为马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的成员，其中之一为白草花叶病毒（Pennisetum mosaic virus，PenMV）[3]。论文网马铃薯Y病毒属病毒是一类基因组相对简单、增殖过程复杂病毒，造成许多农业作物的重大产量损失。该病毒共编码11个成熟的病毒蛋白，其中与病毒基因组RNA 5′末端共价连接的基因组连锁蛋白VPg (viral protein, genome-linked)是一种多功能蛋白，它以不同的剪切形式存在于病毒的生命周期中并且行使多种不同的功能,参加病毒的复制、翻译等基本的生命活动[4-5]。其形态分别有定位于细胞膜系统上的6K2-VPg-Pro，同时定位于细胞质和细胞核的VPg-Pro即NIa以及定位于细胞核的VPg[6]。作为研究最多，也最为透彻的马铃薯Y病毒属病毒编码的蛋白之一，已被报道的VPg蛋白的功能主要是参与病毒基因组的复制和翻译以及病毒的移动[7]。VPg蛋白不存在明显的保守结构域或者基序，在整个马铃薯 Y 病毒属中，该蛋白的序列相似性也只有50%左右，正是这种结构的杂乱无序性，使得 VPg蛋白具备了与其它蛋白结合的能力，从而在病毒侵染的过程中与各种病毒蛋白及寄主因子形成相互作用网络，以发挥多种不同的作用[8]。

目前的玉米品种对PenMV的抗性较好，但PenMV的寄主范围广泛，能通过多种蚜虫传播，且有隐形带毒现象，利于病毒的传播[9]。虽然马铃薯Y病毒属侵染性病毒的报道很多，但能成功侵染单子叶植物特别是玉米的却很少。引起我国玉米矮花叶病的毒原为甘蔗花叶病毒（Sugarcane mosaic virus，SCMV）和PenMV[10]。其中关于SCMV在我国发生的报道较多，而关于PenMV的报道较少。本实验从研究PenMV编码VPg蛋白的亚细胞定位入手，将有助于进一步探索其在病毒侵染过程中发挥的功能，揭示PenMV的致病分子机制，为病害的防治提供理论依据。

确定蛋白质亚细胞定位的方法有很多，包括与报告基因融合瞬时表达、免疫胶体金标记、生物信息学预测、多肽序列分析等。目前主要是用融合报告基因法研究植物蛋白的亚细胞定位，其中应用最为广泛的是绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）。本实验通过PEG介导的玉米原生质体转化的和农杆菌浸润的方法分别在玉米和本氏烟中研究与GFP融合的PenMV VPg蛋白的亚细胞定位。结果显示，PenMV的VPg蛋白在玉米原生质体和本氏烟表皮细胞中均同时定位于细胞核和细胞质。

1  材料与方法 文献综述

1。1 实验材料

1。1。1 供试菌株与质粒

大肠杆菌E。coli DH5a，农杆菌GV3101，质粒pAN581,质粒PGD, PenMV侵染性克隆质粒。

1。1。2 培养基

(1)液体LB 培养基(1000ml)

     胰化蛋白胨(Tryptone)            10 g

     酵母提取物(Yeast extract)         5 g 

     氯化钠(NaCl)                   10g