摘要：在大豆疫霉的基因组中存在着许多的外泌蛋白基因。除了典型的 RXLR，CRN 和 NLP 等家族外，还有许多功能未知的蛋白家族。通过生物信息学分析筛选到 OG5_154821 外泌家族，在侵染过程中高表达。利用植物表达载体在烟草上过表达该家族的部分成员基因，筛选到候选效应分子 Ps_128701 能够引起细胞坏死；Ps_135475可以抑制辣椒疫霉对烟草的侵染。但是这两个基因如何发挥功能仍需要进一步的分析。82404

毕业论文关键词：疫霉；效应分子；OG5_154821

Bioinformatics and Functional Analysis of A Novel Secreted Protein Family of Phytophthora sojae

Abstract：There are many secreted protein genes in the genome of Phytophthora sojae。 In addition to the typical families such as RXLR, CRN and NLP, there are many unknown protein families。 The OG5_154821 family was screened by bioinformatics analysis, which was highly expressed during infection。 We identified two candidate effectors are potentially involved in Phytophthora-plant interactions。 The first candidate effector Ps_128701 can cause cell death in Nicotiana benthamiana。 The second effector Ps_135475 can inhibit the infection of Phytophthora capsici in N。benthamiana。 For these two effectors, the future work is to analyze the molecular basis of their function。

Keywords：Phytophthora; Effectors; OG5_154821

目  录

摘要…1

关键词1

Abstract…1

Key words1

引言…1

1 材料与方法…3

1。1 针对大豆疫霉的生物信息学分析…3

1。2 提取质粒及农杆菌转化…3

1。2。1 大肠杆菌质粒提取3

1。2。2 农杆菌转化…3

1。2。2。1 农杆菌GV1301感受态制备3

1。2。2。2 电击法转化农杆菌…4

1。3 RNA提取，逆转录和定量过程4

1。3。1 RNA提取4

1。3。2 RNA逆转录与定量PCR…4

1。3。2。1 逆转录反应体系与程序…4

1。3。2。1。1 去除RNA中的DNA4

1。3。2。1。2 RNA逆转录…4

1。3。2。2 定量PCR…5

1。4   大肠杆菌JM109感受态的制作及转化5

1。4。1 大肠杆菌感受态的制作5

1。4。2 大肠杆菌的转化…6

1。5 试验用菌株的培养和保存6

1。6  辣椒疫霉的接种方法6

2 结果与讨论6

2。1  OG5_154821 外泌家族基因的克隆6

2。2  OG5_154821 外泌家族的功能分析6

2。2。1 Ps_128701引起植物细胞坏死的作用6

2。2。2 候选效应分子 Ps_128701 在不同侵染时期的转录模式7

2。2。3 候选效应分子对辣椒疫霉侵染的影响…8

3 讨论…8

致谢9

参考文献10

新的大豆疫霉分泌蛋白家族的生物信息学鉴定及功能分析

引言

1  选题背景

大豆疫霉病原菌可以在大豆的主要产区广泛传播。大豆疫霉可以侵染种子，根，茎和叶片，在高感病品种中，它可以导致作物颗粒无收。疫霉属属于半活体营养型致病菌。在最初的活体营养生长阶段，疫霉菌与植物建立了亲密的联系，并且以植物组织为食。在后续的侵染过程中，随着病害的发展，寄居在植物上的疫霉菌导致细胞死亡组织崩溃。与细菌侵染过程类似，疫霉菌同样利用效应子蛋白来操纵植物免疫，进而完成持续的活体寄生。大豆疫霉可以形成指状吸器，嵌入大豆细胞的细胞膜上[1]。

2  效应分子简介及研究进展

疫霉菌分泌大量的效应子，它们具有双重功能，在寄主植物中不含有相应抗病蛋白时，效应子可以抑制植物的防卫反应，促进病原菌的侵染；当寄主植物中含有与之对应的抗病蛋白时，效应子可被寄主植物识别，激发效应子触发的免疫反应(effector-triggered immunity，ETI)，此时的效应子称为无毒蛋白(Avirulence protein，Avr)。