摘要共轭亚油酸是（Conjugated linoleic acid，CLA）是一组含有共轭双键的亚油酸(Linoleic acid，LA)的位置和几何异构体的通称。有多种营养和保健功能，如抗癌、抗动脉粥样硬化、抑制脂肪积累、提高免疫力等。本研究分两部分，首先探究了实验室以构建的来源于痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶大肠表达系统对底物LA的最佳催化反应温度和pH值，分别为30-40℃，pH为6.0-7.0；并在最佳反应条件下测得亚油酸异构酶的酶活为1.48U/ml,LA的转化率为45.21%，CLA的产率为39.49%。其次，以红花籽油为底物，以最佳反应条件为筛选条件，同时加入脂肪酶和亚油酸异构酶进行共催化反应，从8种脂肪酶中筛选出了2种合适的脂肪酶，红花籽油的转化率为43.02%，CLA的产率为39.32%.67312

Abstract Conjugated Linoleic Acid (CLA) is a kind of fatty acid with functions such as anti-tumor, anti oxidation and improving human immunity et al. A gene of linoleic acid isomerase (PAI), originated from acne propionic acid bacillus, with the function of catalyzing LA to cis-12, trans-10 CLA, was expressed in E. Coli. The optimum fermentation conditions of the engneering bacteria were studied, at temperature around 40 ℃, and with pH value 6.7. Two from 8 candidate lipases were selected to using safflower seed oil as the substrate in CLA biosynthesis, with the conversion rate at 43.02%, and the output of CLA at 39.32%.

毕业论文关键词：共轭亚油酸；亚油酸异构酶； 红花籽油； 脂肪酶

Key words: Conjugated linoleic acid CLA； linoleic acid isomerase PAI；Safflower oil；Lapise

目  录

目录 3

引言 4

1 材料与方法 5

1.1  材料 5

1.1.1  实验材料 6

1.1.2  仪器设备 7

1.2 实验方法 7

1.2.1 目标反应 7

1.2.2 CLA的检测方法 7

1.2.3 紫外分光光度计法测CLA标准曲线 8

1.2.4 GC法检测底物LA和产物CLA 9

1.2.6 重组酶PAI酶液的制备 10

1.2.7 重组酶最适反应温度的探索 11

1.2.8 重组酶最适反应pH的探索 11

1.2.9 重组酶在最适反应条件下的转化率和产率 12

1.2.10脂肪酶的筛选 12

1.2.11 双酶联用生产CLA 13

2  结果与分析 13

2.3重组酶的最适反应温度 13

2.4重组酶的最适反应pH 14

2.5重组酶在最适反应条件下的转化率和产率 15

2.6脂肪酶的筛选 17

2.7双酶联用生产CLA 17

3  结论 18

参考文献： 18

致谢 19

引言

共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一类在9与10、10与12或11与13位碳原子处含有顺式或反式共轭双键的十八碳二烯酸，是亚油酸(Linoleic acid，LA)的位置与几何异构体的通称。CLA 异构体类型丰富，自然界以及化学合成制剂中已经发现多达25 种异构体的存在，其中cis-9, trans-11( c9,t11) 和trans-10,cis-12( t10,c12) 是两种含量最多且已经被证实具有生理活性的主要异构体[1]。国内外研究表明，CLA具有很多重要的生理功能， 如抗癌、抗动脉粥样硬化、加强免疫、抑制脂肪沉积、建造骨骼、防止高血糖和糖尿病、促进生长发育等生理功能。CLA的毒理学安全性试验也表明，CLA是一种无毒、无副作用的物质[2,3,4]。因此, CLA已经成为医药、化妆品，功能性食品等研究领域的一个研究热点。论文网