金属纳米粒子在生物传感器的制备中有着广泛的应用，其中金粒子（AuNPs）经常被用作信号探针。而银纳米粒子（AgNPs），由于合成银纳米粒子的困难，使得其在传感器方面应用较少，而金纳米粒子在传感器中有广泛应用[6]。此外，银纳米粒子不被认为是生物相容性的[7]。然而，银纳米粒子的摩尔消光系数比相同粒径大小的金纳米粒子大100多倍，所以可以增加光学传感器的灵敏度[8]。在最近几年，银核金壳纳米粒子（Ag@ AuCSNPs）被用在免疫测定中，可以很好的将金纳米粒子和银纳米粒子的优点相结合。一方面，由于核-壳结构的局部电场增强，使得核-壳纳米粒子具有更优异的物理和化学性质[9]。另一方面，这些核-壳纳米粒子可以弥补金纳米粒子和银纳米粒子的缺陷[10-12]。另外，下方银核可以增强金纳米粒子的表面。

这里，通过动态光散射法（DLS）测定纳米探针粒径的改变从而实现对癌胚抗原（CEA）的高灵敏检测。抗癌胚抗原（anti-CEA）首先修饰银核金壳纳米粒子表面，然后在溶液中，癌胚抗原和抗体之间特异性识别形成夹心复合物，因此诱导银核金壳纳米粒子聚集和它们的平均直径增加。通过动态光散射法检测纳米粒子粒径的增加可以定量地检测癌胚抗原的浓度。癌胚抗原的浓度越高，会导致更多纳米粒子聚集（图1）。

图1  通过使用DLS检测CEA的示意图

Figure 1。 Scheme detection of CEA by using DLS

1 材料与方法

1。1 化学试剂

抗癌胚抗原（anti-CEA ）和癌胚抗原是从博赛有限责任公司（中国郑州）获得。氯化金（氯金酸）、柠檬酸钠、盐酸羟胺（NH2OH·HCl）、牛血清白蛋白（BSA）购自西格玛奥德里奇（Sigma-Aldrich Co，美国）。10 mmol/L的磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7。4，用100 mmol/LNaCl）由我们的实验室自己配置。超纯水由实验室自己制备并用于所有实验。所有化学品均为分析纯。

1。2 实验仪器

动态光散射（DLS）测量通过使用马尔文动态光散射仪（马尔文，美国）进行。对动态光散射仪器在下列条件下操作：温度25 ℃，检测器角90°，入射激光波长683 nm，激光功率为100 mW。纳米粒子的分布状态是从透射电子显微镜（TEM）（JEM-2010 HR，日本）获得。TU-1901紫外-可见吸收光谱仪用来测定纳米粒子的的吸收光谱。离心实验，通过使用高速安亭GL-20G离心机（安亭科学仪器厂，中国上海）。

1。3 制备银/金/抗癌胚抗原（anti-CEA ）复合物

银核金壳纳米粒子根据文献制备[13]。然后，银/金/抗癌胚抗原复合物探针的制备方法如下：通过将100 L的140 ng/mL抗癌胚抗原加至2 mL的银核金壳纳米粒子混合溶液中，并室温孵育2小时。在此之后，加入1 mL 0。25％牛血清白蛋白溶液用于封闭的未反应的活性位点，并防止非特异性吸附。然后，通过在6000 rpm（转/分钟）转速下3次离心除去过量的试剂（每次10分钟，并通过PBS缓冲液洗涤，pH 7。4）。最后，收集含有银/金/抗癌胚抗原的红色溶胶，并溶解在PBS溶液中，在我们的实验中，与抗癌胚抗原（anti-CEA）结合的纳米探针的浓度为4。0 g/mL。文献综述

1。4 动态光散射法（DLS）测定癌胚抗原（CEA）

癌胚抗原的检测是通过加入不同浓度的癌胚抗原溶液到一系列制备的100 L银/金/抗癌胚抗原复合物溶液（PBS，pH= 7。4）中，并在37 ℃孵育15分钟。在此之后，将20 L样品溶液用超纯水稀释成200 L用于动态光散射（DLS）分析测定。

2 结果与分析

2。1 银核金壳纳米粒子的透射电子显微镜（TEM），紫外（UV）和X射线光电子能谱分析（XPS）分析