1 材料与方法

1。1  实验材料与仪器

实验材料：以GP和H602为亲本构建的124份F6代遗传群体(RIL)重组自交系。10。4 mol/L的盐酸，磷标准样品（用磷酸氢二钾配制），显色液（蒸馏水、3mol/L硫酸、2。5%钼酸铵、10%抗坏血酸按2:1:1:1配置而成）。

实验仪器：烘箱，电子天平，磨粉机，离心机，漩涡震荡仪，96孔酶标板，酶标仪等仪器。

1。2  实验方法 

1。2。1  研磨全麦粉

用磨粉机将124份F6代大麦籽粒品系逐一研磨成全麦粉，并套袋做好标记。

1。2。2  称量、提取文献综述

    准确称取80 mg全麦粉置于2 ml离心管中，加入900μL 10。4 mol/L的盐酸，漩涡震荡30 min后，置于4℃冰箱过夜提取。

1。2。3  提取上清液

次日，漩涡震荡30s后，6000 r/min离心2 min，取上清即为无机磷提取液。

1。2。4  配制磷标准样品和显色液

    磷标准样品用磷酸氢二钾配制，含磷量分别是0、0。1、0。2、0。3、0。4和0。5 μg/mg；显色液由2。5%钼酸铵、3mol/L硫酸、10%抗坏血酸、蒸馏水按1:1:1:2的比例配置而成。

1。2。5  钼蓝比色法测定大麦籽粒全麦粉无机磷含量

取10μL提取液于96孔酶标板中(同时将磷标准样品作为对照)，加100μL水和50μL显色液，室温下反应1h后，放入酶标仪中在410nm波长下测定OD值。每个样品重复测定3次，取平均值。

1。2。6  Excel软件记录数据并分析

使用Excel软件记录124份品系的OD值，绘制出标准曲线，并选取R2≥0。99的标准曲线计算各品系无机磷含量，记录在表格中。同时，计算分析各品系无机磷含量的范围、最值、平均值、变异系数，籽粒无机磷含量高于0。46ug/mg的材料占参试材料的比值，并通过Excel图表软件绘制品系间籽粒无机磷含量的频率分析柱状图。

1。2。7  QTL定位与分析

所用遗传图谱由本实验室利用GP与H602 构建的124份F6代重组自交系构建。由 119对SSR分子标记组成，覆盖了大麦7条染色体；该图谱覆盖基因组2239。2cM，标记间平均距离为18。98cM。每条染色体标记数在10-27个，平均每条染色体17个标记。以每个大麦籽粒的无机磷含量作为大麦籽粒的表型值，并利用基于混合线性模型QTL Network2。0软件进行相关QTL定位分析；标记的P值小于0。005时，则认为该标记处存在1个与性状有关的QTL[9]。QTL提出的原则命名。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

2  结果与分析

2。1 大麦籽粒无机磷含量标准曲线

用磷酸氢二钾配制磷标准样品，含磷量分别是0、0。1、0。2、0。3、0。4和0。5μg/mg。加液，加显色液（显色液配置方法见1。2。4），于酶标仪下测定OD值等步骤需均与样品同步，以便于观察对照，也使实验结果更加地准确、可信。通过实验观察可知，磷标准样品与显色液中的钼酸铵相互作用，使溶液呈现蓝色，蓝色的深浅与磷含量成正比，即随着磷标准样品浓度梯度的增大，混合液出现了从浅蓝到深蓝的一系列颜色梯度的变化，经酶标仪测定，其OD值亦随着浓度增大而增大。重复实验后，取平均值并用Excel软件分析可知，OD值与磷含量成线性关系。从而，可以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，建立大麦籽粒无机磷含量的标准曲线（图1），其回归方程为y=0。8132x+0。0819，其相关系数R2为0。9968。因此，本实验选用此标准曲线来计算样品中无机磷含量，即在此曲线上通过样品OD值查得相对应的无机磷含量，以此进行不同品系大麦籽粒的无机磷含量差异分析。