水(mL) 2 1。6 1。4 1。2 1。0 0。8 0。6 0。4 0。2
6%苯酚(mL) 1 1 1 1 1 1 1 1 1
浓H2SO4( mL) 5 5 5 5 5 5 5 5 5
图2。4 表示苯酚-硫酸法测得总糖标准曲线
回归方程:Y=0。0055x-0。0097,R²=0。9948。以葡萄糖作为标准,其总糖的含量与吸光度A在0~100μg/ml的质量浓度范围符合比尔定律得出其回归线方程即标准曲线,由R2 =0。9948<1(接近1),我们可以看出,图中各个点和线的间距很近,说明数据更准确。
2。2。2 单糖的标准曲线
实验方法:分别取葡萄糖标准液(1mg/mL):0、0。2、0。4、0。6、0。8、1。0mL于15mL大试管中,加DNS试剂2mL,沸水浴5min,,然后向试管中各加9mL蒸馏水,然后在540nm处测其吸光度,以0葡萄糖液的一组作为空白对照。文献综述
表2。4 DNS法测单糖
葡萄糖浓度(mL) 0 0。2 0。4 0。6 0。8 1。0
DNS 1。0 0。8 0。6 0。4 0。2 0
沸水浴5min,冷却至室温
蒸馏水(mL) 9。0
图2。5 表示DNS法测单糖含量的标准曲线
回归方程:Y=0。8787x-0。0319, R2 =0。9933;以葡萄糖作为标准,其单糖含量与吸光度A在0~1。2μg/ml的质量浓度范围符合比尔定律得出其回归线方程即标准曲线,且由R2 = 0。9933<1(接近1),我们可以看出,点与线的距离间隔小,数据准确,其回归效果显著。
多糖含量=总糖含量-单糖含量。
2。3 葛仙米多糖的提取
2。3。1 葛仙米多糖提取条件的优化(时间、温度、料液比)
2。3。1。1 葛仙米多糖提取料液比的优化
准确称取4份,0。1g的葛仙米,加水溶解放入90℃下的水浴锅中搅拌5个小时,分别配成料液比为1:300、1:400、1:500、1:600四个条件。
将提取出的粗多糖样品分别取1mL,分别用苯酚-硫酸法和DNS法测出总糖和单糖的含量(总糖稀释十倍,单糖不稀释)。多糖含量=总糖含量-单糖含量,得出不同料液比下葛仙米多糖的含量,选出最优条件。
2。3。1。2 葛仙米多糖提取温度的优化
准确称取4份0。1g干燥的葛仙米,配成料液比为1:500的葛仙米多糖溶液,放入水浴锅加热搅拌5h,分别于70℃、80℃、90℃、95℃四个条件下测定。