有机溶剂萃取法大部分都是使用混合有机试剂,并且需要对其进行多次萃取来提高萃取率[10]。
嘌呤提取比较常用的方法有水解法、微波辅助萃取法和超声波法等。超声波法是利用超声波对液体系的原料作用,从而得到所需样品的方法。这种方法效率高、能耗低、对有效成分破坏程度极低。微波辅助萃取法作为一种先进的、高效的提取技术,其提取效率高、设备不复杂、对环境的污染小、节约时间。被大量用于生物、化学、食品、环境保护等研究领域[11]。
综合考虑实验需要及操作简易,结果易得,经济等方面,本实验采用超声波提取嘌呤。超声波提取不完全,但是操作过程不复杂,经济实惠。并且,本实验研究加工方法对食品中嘌呤含量的影响,不需要提取出食品中所有的嘌呤,所以,选用超声波进行嘌呤提取。
1。3。2 嘌呤检测方法
嘌呤的检测方法其实很早就引起了广大科学研究人员的关注,最开始检测嘌呤是使用纸层析法来实现核酸组成成分的分离[12]。后来由于色谱技术得到飞速发展, 嘌呤的检测由此发展到一个新的过程,快速检测达到了微量级。但因为使用气相色谱法来检测嘌呤必须进行衍生化,其操作条件要求非常高,不能把它当做日常的检测方法使用。而液相色谱法以其检测速度快、使用便捷、灵敏度高等特点成为最常用的检测方法[13]。检测嘌呤的方法还有液相色谱串联质谱法[14]、高效毛细管电泳法[15],紫外分光光度法[16]等。
现在国内外对嘌呤的研究大部分都是将核酸从食物中水解出来,把食物中的嘌呤物质释放出来。因此最后检测的结果是包含食物本身游离的嘌呤和水解出来的嘌呤物质,不是食物自身游离的嘌呤含量[17]。
(1) HPLC法
高效液相色谱法是一种以液体作流动相,使用高压输液系统,将极性不同的溶剂和缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,各成分在色谱柱中被分离后,进入检测器对样品进行检测,以此来分析样品[18]。
特点:快速、高效、灵敏度高,应用范围广,数据相对准确,但是操作复杂[19]。
(2)紫外分光光度法
该方法是在可见光波长范围内测定物质的吸光度,多用于鉴别、杂志检查和定量测定的方法[20]。特点是只能检测一种嘌呤,数据不够精确,但是操作简便,经济实惠,测量结果稳定可靠。
使用紫外分光光度法对食物中的呤含量进行检测和使用高效液相色谱法相比,紫外分光光度法操作非常方便,并且具有很高的灵敏度。且使用这2种检测方法测定嘌呤含量所得到的结果差异无统计学意义[21]。因此,本实验选用紫外分光光度法作为检测食物中嘌呤含量的方法。
1。4 研究目的与意义
嘌呤在食物中的存在范围很广,嘌呤通过人体自身代谢过程产生的物质是尿酸。尿酸的排泄需要经过肾脏,如果嘌呤代谢过程出现混乱或肾脏排泄出现困难,就会使血液中的尿酸含量偏高。虽然痛风这种疾病是由基因控制,但是对于已经患了痛风的群体来说,其痛风的发病和自身的饮食有着紧密的联系。因此,对食物中的嘌呤含量能用快速、经济、简单的测定方法来检测具有非常重要的作用。另外,食物中嘌呤的含量是随着对食物的加工过程而不断改变的,如果能研究出食物中的嘌呤含量在不同的加工方式中的变化规律,可以用来指导工厂生产、加工,或者对人们日常健康饮食提供正确的指导。为此,这个实验对几种常见食物中嘌呤含量进行了检测,同时,研究了加工方式对食物中嘌呤类物质的影响。