摘要目的：研究在创伤性脑损伤（traumatic brain injury ，TBI）模型中丝裂原激酶激酶激酶激酶4(MAP4K4)的表达变化与血脑屏障（BBB）通透性的关系。方法：选取50只健康成年C57小鼠，随机将它们分为sham组、损伤组、对照组。按时间点sham组和损伤组再各分为5个亚组。建立TBI模型，在损伤后的1h、3h、6h、12h、24h这5个时间点，取脑组织的损伤侧和对侧。用伊文思蓝（Evans Blue，EB）的方法评价BBB通透性的改变，用western blot检测MAP4K4、Claudin-5、VE-cadherin的表达，观察BBB是否损伤。结果：①TBI模型建立成功，小鼠脑实质可见明显损伤；②TBI后EB的吸光值增加，全脑BBB通透性增大；③TBI后VE-cadherin表达减少，而Claudin-5、MAP4K4表达无显著性变化。结论：小鼠TBI后BBB通透性增加，但MAP4K4没有参与BBB通透性的改变。88010

Objective：to investigate the relationship between the expression of (MAP4K4) and the permeability of blood-brain barrier (BBB) in traumatic brain injury (TBI)。Methods:50 Healthy adult C57 mice were randomly pided into sham group、injury group、control group。According to the time point the sham group and injury group are pided into five subgroups。 Establish the model of TBI，the lesion side and the contralateral of the brains of the mice were taken out at 1h，3h，6h，12h，24h after TBI。 Evaluate the alteration of BBB permeability by EB extravasation method，the expression of MAP4K4，Claudin-5，VE-cadherin were detected with western blot and observe whether the BBB damage or not。 Results：①The model of TBI was established successfully and there were obvious injuries in brain parenchyma of mice；②The absorbance of EB and the permeability of BBB in the whole brain increase after TBI；③The expression of VE-cadherin was decreasing and the expression of Claudin-5 and MAP4K4 had no Significant changes after TBI。 Conclusion：The permeability of BBB increases after TBI in mice，but MAP4K4 didn’t participate in the process of changes in BBB permeability。源-于,优W尔Y论L文.网wwW.youeRw.com 原文+QQ75201,8766

毕业论文关键词：创伤性脑损伤；血脑屏障； MAP4K4；炎症反应

Keyword: traumatic brain injury； blood-brain barrier； MAP4K4；inflammatory response

目    录

引言 4

材料与方法 5

1。材料 5

1。1 主要仪器与设备 5

1。2 主要化学试剂 5

1。3主要试剂的配制 5

2。实验方法 6

2。1实验动物与分组 6

2。2 TBI模型的建立 6

2。3 血脑屏障通透性的测定 6

2。4。统计学处理 9

实验结果 9From~优E尔L论E文W网wWw.YoUeRw.com 加QQ7520.18766
讨论 13

参考文献 15

致谢 16

引言

创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）是指外部物理损伤在头脑部时发生的一种器质性损伤。TBI具有发生率高、病情变化快、致残率、致死率高的特点[1]，常可导致患者意识丧失、头痛眩晕、智力减退、记忆缺失以及神经功能障碍等，是常见创伤的重要组成部分。有研究发现[2]，TBI24小时内发生的一系列病理生理变化，使血脑屏障通透性发生改变，导致血管源性、细胞源性脑水肿，进而加重创伤性脑水肿。而在TBI后发生创伤性脑水肿又会进一步引起神经功能障碍等损伤。由此看来，血脑屏障的损伤与否与TBI之间是有一定的关联的。血脑屏障（blood—brain barrier，BBB）是维持中枢神经系统独特内环境稳态的重要结构，主要由脑毛细血管内皮细胞与内皮细胞间紧密连接构成，通过调节脑实质与循环血液之间物质交换，对维持神经系统内环境的稳态起决定性作用［3］。BBB的特性为低通透性，当BBB遭到破坏时，其通透性的增加是中枢神经系统疾病和脑损伤发生、发展的重要原因。丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4（mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4，MAP4K4）是丝／苏氨酸激酶亚家族STE20中的一员，属于丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号传导通路的一个上游激活因子，参与细胞的多种生物学行为，包括细胞凋亡、分化和增殖、细胞周期调控，细胞生存的维持以及细胞恶性转化等。研究发现，MAP4K4在癌症、糖尿病等方面有至关重要的作用[4、5]。值得关注的是，MAP4K4与炎症反应也有紧密的联系。有研究发现，在MAP4K4敲除鼠中，由于PKC-θ通路和MAPK的磷酸化作用受到抑制，CD4+ T细胞的增殖、活化和细胞因子的产生也受到抑制[6]。而在肺损伤的研究中发现，MAP4K4条件敲除使得肿瘤坏死因子受体相关因子2（TNF receptor associated factor 2，TRAF2）的表达增加，导致纵膈淋巴结的IL-6水平升高，然后通过JNK、ERK、P38通路诱导肺部炎症反应，从而导致肺部损伤[7]。这些与MAP4K4相关的炎症介质也都与BBB的完整性息息相关，而目前国内外对两者关系的研究并不多见，MAP4K4与BBB之间是否存在着潜在的联系也还不清楚，所以本实验针对MAP4K4与BBB的关系进行了初步的探索。